Note ABES Development of new bioorthogonal ligation reactions Développement de nouvelles réactions de ligation bioorthogonales Ligation bioorthogonale CuAAC SpAAC Microscopy de fluorescence confocale Ligation in cellulo Screening HPLC Bioorthogonal ligation CuAAC SpAAC Confocal fluorescence microscopy In cellulo HPLC screening 547.2 Réactions chimiques Cyclisation (chimie) Dérivatisation (chimie) Microscopie de fluorescence Le principal objectif de cette thèse a consisté au développement d’une méthode de screenning pour la découverte de nouvelles réactions de ligations bioorthogonales ainsi que son application sur une bibliothèque développée pour cette étude. Par conséquent, un système de screening a été conçu en trois étapes consistant au départ en une analyse HPLC, puis une évaluation basée sur la fluorescence de haute résolution et finalement un test de microscopie confocal in cellulo. Puis, nous avons standardisé toutes les analyses avec les réactions CuAAC et SpAAC. En outre, nous avons synthétisés 18 réactifs d’intérêts et effectué un screening de 58 expériences de ligation avec une évaluation par méthode HPLC. Parmi les 9 réponses positives obtenues figure 6 réactions impliquant de nouveaux réactifs et les analyses LC‐MS ont pu tous les valider comme des réactions de cycloaddition directe à l’exception d’une réaction. Finalement, nous avons pu appliquer la méthode in cellulo développée, afin d’évaluer la pertinence des réactions de chélation CuAAC pour une application sur cellules. The main goal of this thesis was the development of a screening method for the discovery of new bioorthogonal ligation reactions as well as its application on a self‐designed library. Therefore we designed a three step screening system consisting of a preliminary HPLC assay, a high resolution fluorescence based assay and a final in cellulo confocal microscopy assay.Subsequently we standardized all assays with the highly established CuAAC and SpAAC. Furthermore, we successfully synthesized 18 reagents of interest and screened 58 ligation experiments with the help of the HPLC setup. The 9 positive hits from this screening contained 6 reactions involving novel reagents and LCMS analysis was able to validate all but one as straight forward cycloaddition reaction. Finally we were able to apply the newly developed in cellulo assay to assess the suitability of chelating CuAAC for in cell application. Electronic Thesis or Dissertation Text en PDF 6985699 Université de Strasbourg Strasbourg 2014-12-31 application/pdf https://publication-theses.unistra.fr/restreint/theses_doctorat/2013/KING_Mathias_2013_ED222.pdf King Mathias 1983-09-10 DE 174668333 20920093 https://theses.fr/2013STRAF021 2013STRAF021 https://doi.org/10.70675/a3a82aa3zebd2z465fzac4czf144918db8ce 2013-06-04 Chimie organique Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Wagner Alain MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 127880518 Baati Rachid MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_2 153377429 Texier Isabelle MADS_PRESIDENT_DU_JURY 142548391 Klymchenko Andrey MADS_MEMBRE_DU_JURY_1 155705458 Carell Thomas MADS_RAPPORTEUR_1 22992929X Jäschke Andres MADS_RAPPORTEUR_2 230486118 École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 CH 156504081 Chémo-biologie synthétique et thérapeutique (Strasbourg ; 2009-....) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 UMR 7199 157555011 ddc:540 Wagner Alain Baati Rachid Texier-Nogues Isabelle Klymchenko Andrey Carell Thomas Jäschke Andres École doctorale Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....) Conception et application de molécules bioactives (Strasbourg) PDF 6985699