Note ABES Caractérisation biochimique et structurale des RNases P et MRP chez la levure Saccharomyces cerevisiae Biochemical and structural characterization of RNases P and MRP in S. cerevisiae RNase P RNase MRP Microscopie électronique Assemblage modulaire Maturation ARN RNase P RNase MRP Electron microscopy Modular assembly RNA-processing 572.8 Épissage (génétique) Cellules eucaryotes Ribonucléases Structure Microscopie électronique Saccharomyces cerevisiae La RNase P est une endoribonucléase responsable de la maturation de l’extrémité 5’ des ARNt prématures. Holoenzyme très conservée, elle est constituée d’une composante ARN formant le noyau catalytique et d’une composante protéique dont le nombre de sous-unités est variable : une protéine chez les bactéries, 5 chez les archées et d’au moins 9 chez les eucaryotes. Les eucaryotes possèdent également une autre endoribonucléase, la RNase MRP dont la composition est proche de la RNase P tant au niveau ribonucléique que protéique mais avec une spécificité de substrat propre. Dans cette étude, nous proposons une méthode originale et spécifique pour purifier la RNase P et la RNase MRP de S. cerevisiae. Grâce à la microscopie électronique et au traitement d’images, nous avons déterminé la première structure de ces deux holoenzymes à une résolution d’environ 1.5 nm. Ces structures révèlent une architecture modulaire commune où les protéines stabilisent la composante ARN et contribuent à l’édification de cavités et de conduits. Les spécificités structurales sont localisées en des positions stratégiques pour l’identification et la coordination du substrat. Ribonuclease P (RNase P) is an endoribonuclease that cleaves the 5'-leader sequence of pre-tRNAs. RNase P is conserved between all taxonomic kingdoms and consists of a catalytic RNA subunit and protein components of variable size, from one protein in bacteria to 5 proteins in archae and at least 9 proteins in eukaryotic cells. In addition to RNase P, eukaryotes possess the RNase MRP which has a related RNA core and shares 8 proteins subunits with RNase P but with its own substrate specificity. Here, we propose an original method to purify specifically RNase P and RNase MRP from S. cerevisiae. Using electron microscopy and image processing, we solved the first structure of these two holoenzymes at a resolution of about 1.5 nm. We showed that eukaryotic RNase P and RNase MRP have a modular architecture, where proteins stabilize the RNA fold and contribute to cavities, channels and chambers between the modules.Structural features are located at strategic positions for substrate recognition by shape and coordination of the cleaved-off sequence. Electronic Thesis or Dissertation Text fr PDF 22156170 Université de Strasbourg Strasbourg 2013-12-31 https://theses.hal.science/tel-00804257 application/pdf 13951204 https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2013/Batisse_Claire_2013_ED414.pdf http://www.theses.fr/2013STRAJ001/abes https://theses.hal.science/tel-00804257 https://theses.hal.science/tel-00804257 https://theses.hal.science/tel-00804257 Batisse Claire Blachier 1980-03-03 FR 168192101 21218595 https://theses.fr/2013STRAJ001 2013STRAJ001 https://doi.org/10.70675/d73f479dze922z42f2z8a58ze73a725ffa40 2013-01-23 Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Giegé Philippe MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 152079335 Dreyssé Hugues MADS_PRESIDENT_DU_JURY Haug Danielle MADS_MEMBRE_DU_JURY_1 Renaud Jean-Paul MADS_RAPPORTEUR_1 Séraphin Bertrand MADS_RAPPORTEUR_2 Charpentier Bruno MADS_RAPPORTEUR_3 Golinelli Béatrice MADS_RAPPORTEUR_4 École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 VS 156502844 Institut de biologie moléculaire des plantes (Strasbourg) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 UPR 2357 156775727 444 ddc:570 Giegé Philippe Dreyssé Hugues Haug Danielle Renaud Jean-Paul Séraphin Bertrand Charpentier Bruno Golinelli Béatrice École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg) Institut de biologie moléculaire des plantes (Strasbourg) PDF 22156170