Note ABES Développement du couplage électrophorèse capillaire-spectrométrie de masse à source MALDI : applications à la caractérisation de protéines Development of coupling capillary electrophoresis - mass spectrometry MALDI source : applications to the characterization of proteins Électrophorèse capillaire Spectrometrie de masse CE/MALDI-MS Anticorps monoclonaux Enrichissement Electrophoresis capillary Mass spectrometry Coupling Shealth liquid CE/MALDI-MS Monoclonal antibodies Intact protein Enrichissement 543 Électrophorèse capillaire Spectrométrie de masse Protéines Au cours de ce travail, nous avons mis au point une nouvelle interface CE/MALDI-MS automatisée, équipée d’une cellule UV/visible déportée, et d’une distribution automatique de matrice intégrée. Ce nouveau système a été évalué sur des mélanges différents de protéines entières, de digestats de protéines et d’anticorps monoclonaux (mAbs). Les résultats obtenus lors de cette évaluation ont montré la complémentarité de la nouvelle interface avec les systèmes analytiques classiques. De plus, nous avons montré la première séparation et analyse de mAbs entier par CE/MALDI-MS. Dans un second travail, la nouvelle interface a été utilisée pour effectuer la première analyse Top Down de proteine entière et de mAbs par collecte et enrichissement de fraction. Cette stratégie a montré la répétabilité du système permettant de séparer des analytes d’intérêt et d’enrichir les dépôts MALDI jusqu'à de très hautes quantités d’analytes permettant l’obtention de spectre Top Down. Au cours du troisième travail, le nouveau système CE/MALDI-MS a été utilisé dans une stratégie originale à 2 dimensions de séparation et de collecte d’isoformes de mAbs entiers ou partiellement digérés suivi d’infusions et analyses à l’aide du nanosprayer CESI. Pour cela, nous avons mis au point des conditions électrophorétiques dit « asymétriques » séparant les mAbs dans des conditions très salées mais collectés dans un milieu compatible avec l’ESI-MS. Cette stratégie inédite a permis d’effectuer la première séparation et caractérisation de mAbs par CE-MS. Parallèlement, nous avons mis au point le premier dosage plasmatique d’ITPP par MALDI-TOF MS et surtout la création de CEToolbox, une application Androïd gratuite pour smartphone et tablette permettant le calcul des principales grandeurs mathématiques pour la caractérisation et l’optimisation des séparations par électrophorèse capillaire. In this work, we developed a new interface CE/MALDI-MS automated, equipped with a UV/visible cell remote, and integrated automatic distribution of matrix. This new system has been evaluated on different mixtures of intact protein, digested protein and monoclonal antibodies (mAbs). The results obtained during this evaluation showed the complementarity of the new interface with conventional analytical systems. Furthermore, we have shown the first separation and analysis of mAbs by CE/MALDI-MS. In a second work, the new interface was used to perform the first Top Down analysis for intact protein and mAbs by fraction collection and enrichment. This strategy has shown the repeatability of the system for separating analytes and the enrichissment the MALDI deposits up to very high amounts compatible for Top Down approach. In the third work, the new system CE/MALDI-MS has been used in an original 2-dimensional strategy of separating and collecting intact mAbs isoforms or partially digested followed by infusions and analyzes with CESI nanosprayer. For this, we have developed electrophoretic condition so-called "asymmetric" allowing the separation of mAbs under very salty conditions but collected in a totally compatible solution with ESI-MS. This novel strategy allowed for the first separation and characterization of mAbs by CE-MS. Meanwhile, we have developed the first plasma level of ITPP by MALDI-TOF-MS and particularly the creation of CEToolbox as a Free Android application for smartphone and tablet enabling the calculation of the main mathematical quantities for characterization and optimization of CE separations. Electronic Thesis or Dissertation Text fr en PDF 78409727 Université de Strasbourg Strasbourg 2015-12-31 https://theses.hal.science/tel-01126916 application/pdf 78252098 https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2014/BIACCHI_Michael_2014_ED222.pdf http://www.theses.fr/2014STRAF033/abes https://theses.hal.science/tel-01126916 https://theses.hal.science/tel-01126916 https://theses.hal.science/tel-01126916 https://theses.hal.science/tel-01126916 Biacchi Michael 1977-03-26 FR 182087492 40715430 https://theses.fr/2014STRAF033 2014STRAF033 https://doi.org/10.70675/728a75ffz7df8z4de1z86f3zfb73e00767d8 2014-09-23 Chimie analytique Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Leize-Wagner Emmanuelle MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 121298019 Millet Maurice MADS_PRESIDENT_DU_JURY 099038463 Capolaghi Bernard MADS_MEMBRE_DU_JURY_1 183703790 François Yannis MADS_MEMBRE_DU_JURY_2 116029684 Varenne Anne MADS_RAPPORTEUR_1 133872106 Cole Richard B. MADS_RAPPORTEUR_2 11393176X École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 CH 156504081 Chimie de la matière complexe (Strasbourg) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 157547027 261986 ddc:540 Leize-Wagner Emmanuelle Millet Maurice Capolaghi Bernard François Yannis Varenne Anne Cole Richard B. École doctorale Sciences chimiques (Strasbourg) Chimie de la matière complexe (Strasbourg) PDF 78409727