Développement du couplage électrophorèse capillaire - spectrométrie de masse haute sensibilité : application à la caractérisation fine de protéines
Development of high sensitivity capillary electrophoresis - mass spectrometry coupling : application to multi-level characterization of proteins
Chimie analytique
Spectrométrie de masse
Electrophorèse capillaire
Anticorps monoclonaux
Glycosylations
Modifications post-traductionnelles
Complexes non-covalents
Analytical chemistry
Mass spectrometry
Capillary electrophoresis
543
Électrophorèse capillaire
Spectrométrie de masse
Protéines
Anticorps monoclonaux
Les interfaces permettant le couplage entre l'électrophorèse capillaire (CE) et la spectrométrie de masse (MS) à source ESI souffrent actuellement d'un manque de robustesse ou de sensibilité. Les travaux présentés décrivent la mise en oeuvre d'un nouveau type d'interface CE-ESl-MS â haute sensibilité CESl-MS. La caractérisation du spray généré par CESl-MS a montré la production d'un nanoESI induisant une augmentation importante de la sensibilité par rapport au régime ESI classique. Le système CESl-MS a pu ainsi être mis en oeuvre comme plateforme d'infusion nanoESI et utilisé pour l'étude de complexes non-covalents de haut poids moléculaires en MS native. Une méthodologie par CESl-MS/MS a également été développée pour la caractérisation complète de la structure primaire d'anticorps monoclonaux (mAbs). Les résultats montrent la possibilité en une unique injection de caractériser l'ensemble de la séquence d'acides aminés, un nombre significatif de glycosylations et l'ensemble des modifications d'intérêts. Cette méthodologie a pu être appliquée pour déterminer la similarité entre des mAbs commerciaux et leur candidat biosimilaire respectif.
Interfacings allowing the hyphenation of capillary electrophoresis (CE) to ESI mass spectrometry(MS) currently suffer from lack of robustness and sensitivity. This work describes the application of a new design of CE-ESl-MS coupling referred as the CESl-MS. Characterization of the ESI generated through the CESl-MS system showed the production of a nanoESI allowing to increase drastically the sensitivity compared to conventional ESI. The CESl-MS was used as a nanoESI infusion platform allowing to study high molecular masses noncovalent complexes in native MS. A CESl-MS/MS method was developed enabling the complete primary structure characterization o fmonoclonal antibodies (mAbs). Results showed the ability of the methodology in a single injection to simultaneously characterize the entire amino acid sequence, a significant number of glycosylation and all the posttranslational modifications of interest. Finally the methodotogy was applied to assess the similarity between marketed mAbs and their respective biosimilar candidate.
Electronic Thesis or Dissertation
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9646855
Université de Strasbourg
Strasbourg
2015-12-31
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1830626
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https://theses.hal.science/tel-01126909
https://theses.hal.science/tel-01126909
https://theses.hal.science/tel-01126909
https://theses.fr/2014STRAF040/abes
https://theses.hal.science/tel-01126909
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Article de revue
Gahoual
Rabah
1985-08-01
FR
182090825
40712654
https://theses.fr/2014STRAF040
2014STRAF040
https://doi.org/10.70675/582ad189z46faz4001zb861z0f4841228c12
2014-09-29
Chimie analytique
Strasbourg
131056549
Doctorat
Docteur es
non
oui
Leize-Wagner
Emmanuelle
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181096676
Hellwig
Petra
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François
Yannis
MADS_MEMBRE_DU_JURY_1
116029684
Beck
Alain
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116405171
Bolbach
Gérard
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158683439
Wuhrer
Manfred
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183762177
École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....)
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CH
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Chimie de la matière complexe (Strasbourg)
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261986
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Beck
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École doctorale Sciences chimiques (Strasbourg)
Chimie de la matière complexe (Strasbourg)
PDF
9646855