Note ABES Structural characterization of proteinaceous RNase P from Arabidopsis thaliana Etudes structurales d'une RNase P protéique d'Arabidopsis thaliana RNase P Protéines PPR Maturation d'ARNt PRORP SAXS Cristallisation RNase P PPR proteins TRNA maturation PRORP SAXS Crystallization 572.8 ARN de transfert Ribonucléases Arabidopsis thaliana Cristallisation Maturation post-transcriptionnelle des ARN Dissertations universitaires La maturation des ARNt en 5' est réalisée par RNase P. C'est un ribozyme chez les bactéries, les fungi et les nuclei des mammifères et un enzyme protéique dans les plantes ou des organelles des mammifères qui s’appelle PRORP. Il y a trois PRORP dans A. thaliana. PRORP contiennent deux domaines : un domaine PPR qui reconnaît spécifiquement des séquences d'ARN et un domaine nucléase qui assure la coupure endonucléolytique 5' des précurseurs d’ARNt. Pendant ma thèse j'ai pu montré par des méthodes biophysiques et structurales comme SRCD et SAXS que PRORP1 et 2 sont composées en majorité des hélices alpha Elles ont un rayon de giration de 33 Å et contiennent deux domaines distincts avec et une dimension maximale de 110 Å. Pour le complex entre un substrat d'ARNt et PRORP une constante de dissociation de 1 uM a pu être confirmé par la microcalorimétrie, la thermophorèse et l'ultracentrifugation analytique. Ces analyses nous ont permis de construire un modèle PRORP et un substrat d'ARNt. RNase P cleaves 5’ leaders of precursor tRNAs. RNase P is a ribozyme in bacteria, fungi and animal nuclei and a protein in animal organelles, plants and many other organism. There are three PRORPs in A. thaliana. MALS, SRCD and SAXS provided first structural information: 1) PRORPs are monomers in solution. 2) PRORP 1-2 have a high alpha-helical content. 3) PRORPs are composed of two distinct domains with a radius of gyration of 33 A. These results together with homology modelling enabled us to build a first model of PRORPs in complex with tRNA. Using three different methods, isothermal titration calorimetry, microscale thermophoresis and analytical ultracentrifugation, a binding constant of about 1 µM could be determined for the system PRORP2mDD and L5T0 tRNA. This helped us conducting a SAXS experiment taking into account the low resolution affinity and designed to provide the direct structural data of a complex of proteinaceous RNase P with a substrate tRNA. Electronic Thesis or Dissertation Text fr PDF 15339466 Université de Strasbourg Strasbourg 2015-12-31 https://theses.hal.science/tel-01236246 application/pdf 15266477 https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2014/Pinker_Franziska_2014_ED414.pdf http://www.theses.fr/2014STRAJ093/abes https://theses.hal.science/tel-01236246 https://theses.hal.science/tel-01236246 https://theses.hal.science/tel-01236246 https://theses.hal.science/tel-01236246 Pinker Franziska 1981-10-12 FR 189899786 40713519 https://theses.fr/2014STRAJ093 2014STRAJ093 https://doi.org/10.70675/10dc778dz4edbz4fd5z9bd3zd96dcefa7b7b 2014-09-15 Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Sauter Claude MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 142349844 Giegé Philippe MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_2 152079335 152079335 Romby Pascale MADS_PRESIDENT_DU_JURY 031545009 Marchfelder Anita MADS_MEMBRE_DU_JURY_1 185270247 Rossmanith Walter MADS_RAPPORTEUR_1 18990139X Schmitt Emmanuelle MADS_RAPPORTEUR_2 164047573 École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 VS 156502844 Architecture et réactivité de l'ARN (Strasbourg ; 1992-....) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 93780 157545687 ddc:570 Sauter Claude Giegé Philippe Romby Pascale Marchfelder Anita Rossmanith Walter Schmitt Emmanuelle École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg) Architecture et réactivité de l'ARN (Strasbourg) PDF 15339466