Note ABES Découverte et caractérisation d'une nouvelle forme de méthionyl-ARNt synthétase nucléaire chez la levure Saccharomyces cerevisiae Discovery and characterization of a new methionyl-tRNA synthetase in Saccharomyces cerevisiae Aminoacyl-ARNt synthétase ARNt Noyau Saccharomyces cerevisiae Transition diauxique Transcription Clivage Aminoacyl-tRNA synthetase TRNA Nucleus Saccharomyces cerevisiae Diauxic shift Transcription Cleavage 572.8 Saccharomyces cerevisiae Cytogénétique Élongation (biologie moléculaire) ARN de transfert Traduction génétique Aminoacyl-ARNt synthétases La methionyl-ARNt synthétase (MetRS) de Saccharomyces cerevisiae aminoacyle les ARNt méthionine initiateur et élongateur (ARNtiMet et ARNteMet), mais possède également des fonctions atypiques. Nous avons montré que la MetRS rejoint le noyau durant la transition diauxique afin de réguler la transcription des gènes nucléaires des complexes III et V de la chaîne respiratoire mitochondriale. Pour ce faire, la MetRS possède au moins deux signaux de localisation nucléaire (NLS) dans sa séquence, l’un se situant dans les 55 premiers acides aminés (aa) et le second, au delà de la partie N-terminale lui permettant de recruter les sous-unités Rpb4 et Rpb7 de l’ARN pol II. Nous avons montré qu’en fermentation, la MetRS est clivée entre le 114ème et le 132ème aa et que cette forme clivée est essentielle à la viabilité des cellules, puisqu’un variant non clivé (MetRSK11A) ne permet pas la croissance. Nous avons surproduit et purifié un mutant de la MetRS clivée (MetRSΔ142) et montré que ce variant est plus efficace pour l’aminoacylation de l’ARNtiMet que la forme entière de MetRS. Ainsi, notre étude suggère que chez S. cerevisiae, la forme longue de MetRS cytoplasmique permet l’aminoacylation de l’ARNteMet, la forme longue de MetRS nucléaire régule la transcription, et la forme clivée de MetRS nucléaire et cytoplasmique permet l’aminoacylation de l’ARNtiMet Methionyl-tRNA synthetase (MetRS) is the enzyme in charge of aminocylation of tRNA methionine initiator and elongator (tRNAiMet et tRNAeMet), but also displays atypical functions in Saccharomyces cerevisiae. In the present work, we showed that MetRS is imported to the nucleus during the diauxic shift in order to regulate transcription of genes coding for the complexes III and V subunits of the mitochondrial respiratory chain. To do so, MetRS harbors at least two nuclear localization signals (NLS), located within the 55 first aminoacids (NLS1) and beyond the N-terminal part (NLS2). The N- terminal part is responsible for the recruitment of RNA pol II subunits Rpb4 and Rpb7. We also showed that MetRS is cleaved through the 114th and the 132nd aminoacid during fermentation and that the proteolysed form is essential for the viability of the cell, since a mutant of MetRS which is not cleaved (MetRSK11A) did not allows the growth. We showed that an overproduced and purified a mutant representative of the cleaved form (MetRSΔ142) is more efficient for tRNAiMet aminoacylation than the full length MetRS. Thus, our study suggests that in S. cerevisiae, the cytoplasmic full length MetRS aminoacylates tRNAeMet, the nuclear full length MetRS regulates genes transcription, and the cytoplasmic and nuclear cleaved MetRS aminoacylates the tRNAiMet. Electronic Thesis or Dissertation Text fr PDF 12379179 Université de Strasbourg Strasbourg 2017-12-31 https://theses.hal.science/tel-01565221 application/pdf 11126337 https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2016/Laporte_Daphne_2016_ED414.pdf http://www.theses.fr/2016STRAJ066/abes https://theses.hal.science/tel-01565221 https://theses.hal.science/tel-01565221 https://theses.hal.science/tel-01565221 Laporte Daphné 1989-04-16 FR 203193466 21011847 https://theses.fr/2016STRAJ066 2016STRAJ066 https://doi.org/10.70675/4c65a659z806dz4335z9e1ezca909ff26ab6 2016-09-30 Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Becker Hubert MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 151566704 Mirande Marc MADS_PRESIDENT_DU_JURY 03139342X Becker Hubert MADS_MEMBRE_DU_JURY_1 151566704 Mirande Marc MADS_MEMBRE_DU_JURY_2 03139342X Hakimi Mohamed-Ali MADS_MEMBRE_DU_JURY_3 097430005 Lescure Alain MADS_MEMBRE_DU_JURY_4 117665509 Mirande Marc MADS_RAPPORTEUR_1 03139342X Hakimi Mohamed-Ali MADS_RAPPORTEUR_2 097430005 École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 VS 156502844 Génétique moléculaire, génomique et microbiologie (Strasbourg) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 156733447 93783 ddc:570 Becker Hubert Mirande Marc Becker Hubert Mirande Marc Hakimi Mohamed-Ali Lescure Alain Mirande Marc Hakimi Mohamed-Ali École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg) Génétique moléculaire, génomique et microbiologie (Strasbourg) PDF 12379179