Note ABES Biogénèse des siRNAs endogènes chez Arabidopsis thaliana : étude fonctionnelle de DRB7.2, une nouvelle protéine de fixation à l'ARN double brin et développement d'outils moléculaires pour la caractérisation du mode d'action de DCL4 siRNA biogenesis in Arabidopsis thaliana : functional study of a new double-stranded RNA binding protein, DRB7.2 and developement of molecular tools for DCL4 study DRBs SRNAs EndoIR Séquestration DCL4 Outils moléculaires Spécificité de reconnaissance DRBs SRNAs EndoIR Sequestration DCLs Molecular tools Structural determinants 572.8 581 Arabidopsis thaliana Transcription génétique Ribonucléases Plantes -- Inactivation génique ARN interférence Petit ARN interférent Dissertations universitaires Éléments silenceurs transcriptionnels Dissertations universitaires Les ARN double brin (ARNdb) sont les molécules clés initiatrices du RNA silencing, à partir desquelles les différentes classes de petits ARN (sRNAs), conférant la séquence spécificité de ce mécanisme, vont être produit. Chez la plante modèle Arabidopsis thaliana, le clivage des divers ARNdb en sRNAs est opéré par quatre enzymes de type RNase III, nommées DCL1 à DCL4, dont l’activité peut être assistée par des protéines fixant l’ARNdb (DRBs). Au cours de cette thèse, j’ai pu caractériser la fonction d’une nouvelle DRB, DRB7.2. Les résultats obtenus m’ont permis de démontrer que cette protéine régule la production d’une classe particulière de sRNAs endogènes, les endoIR-siRNAs, en séquestrant spécifiquement leurs précurseurs ARNdb, inhibant ainsi leur clivage par les différents DCLs. En parallèle, j’ai également développé des outils moléculaires afin d’étudier le mode d’action du DCL le plus polyvalent chez les plantes, DCL4. La caractérisation détaillée de ces outils a permis de révéler le rôle clé de déterminant structuraux distinct (protéiques ou nucléiques) impliqués dans la spécificité de reconnaissance et de clivage des divers substrats ARNdb par cette enzyme. RNA silencing is initiated by double-stranded RNA (dsRNA) molecules that will be processed into various classes of small RNAs (sRNAs), which confer the sequence-specificity of this mechanism. In the model plant Arabidopsis thaliana, dsRNA processing is mediated by four distinct RNaseIII-like enzymes, named DCL1 to DCL4, which can be assisted by dsRNA-binding proteins (DRBs). During my PhD, I was able to characterize in details the function of a new DRB protein, DRB7.2. Our results revealed that this protein regulates the accumulation of a specific class of endogenous sRNAs, the endoIR-siRNAs, by selectively sequestering their dsRNA precursors and inhibiting their cleavage by the DCLs. In parallel, I also developed molecular tools to study the mode of action of the most versatile DCL in plants, DCL4. Detailed characterization of these tools revealed key roles of distinct structural determinants (at the protein or RNA level), implicated in the specificity and cleavage efficiency of the various dsRNA susbtrates by DCL4. Electronic Thesis or Dissertation Text fr PDF 4522861 Université de Strasbourg Strasbourg 2017-12-31 https://theses.hal.science/tel-01681635 application/pdf 25423737 https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2017/MONTAVON_Thomas_2017_ED414.pdf http://www.theses.fr/2017STRAJ002/abes https://theses.hal.science/tel-01681635 https://theses.hal.science/tel-01681635 https://theses.hal.science/tel-01681635 Montavon Thomas 1987-04-15 FR 20299676X 40608722 https://theses.fr/2017STRAJ002 2017STRAJ002 https://doi.org/10.70675/1da4b52ez4397z4e3bz8f17z3d3dfb7656b1 2017-01-06 Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Dunoyer Patrice MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 060609575 Pfeffer Sébastien MADS_PRESIDENT_DU_JURY 069221928 Bucher Étienne MADS_RAPPORTEUR_1 202996905 Lagrange Thierry MADS_RAPPORTEUR_2 096199482 École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 VS 156502844 Institut de biologie moléculaire des plantes (Strasbourg) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 156775727 444 ddc:570 ddc:580 Dunoyer Patrice Pfeffer Sébastien Bucher Étienne Lagrange Thierry École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) Institut de biologie moléculaire des plantes (Strasbourg) PDF 4522861 confidentialité 2017-01-06 2017-12-31 confidentialité 2017-01-06 2017-12-31 confidentialité 2017-01-06 2017-12-31 confidentialité 2017-01-06 2017-12-31