Caractérisation cellulaire de nouveaux traitements anti-VIH-1 ciblant la NucléoCapside et observation d’une forme compacte de Gag in cellulo
Langue Français
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Auteur : Pires, Manuel
Date de soutenance : 17-03-2017
Directeur(s) de thèse : Mély, Yves - Rocquigny, Hugues de
Établissement de soutenance : Strasbourg
Laboratoire : Laboratoire de biophotonique et pharmacologie (Strasbourg)
École doctorale : École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
Discipline : Virologie : aspects moléculaires et médicaux
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie, Médecine et santé
Mots-clés libres : VIH-1, NCp7, Inhibiteurs, Gag, Forme compacte, Split-GFP
Mots-clés :
- VIH (virus)
- Aspect moléculaire
- Protéines virales
- Intégrase du VIH
- Nucléosides antiviraux
- Protéines nucléocapside
Résumé : Les thérapies actuelles ciblant les étapes clés du cycle de réplication du VIH-1 sont puissantes et sélectives, mais des échecs thérapeutiques sont apparus en raison de l'émergence de résistance aux médicaments. Par conséquent, il existe un besoin urgent de développer de nouveaux médicaments qui utilisent des stratégies thérapeutiques alternatives. Cibler la protéine de nucléocapside (NCp7) est une stratégie prometteuse car NCp7 joue un rôle clé dans la réplication du VIH et sa séquence est hautement conservée dans les différentes souches du VIH. L’objectif du consortium européen THINPAD est de sélectionner des inhibiteurs spécifiques de la NCp7. Pour cribler les molécules, nous avons établi un test d’infectivité in cellulo utilisant la capacité des molécules sélectionnées à inhiber l'infection de cellules HeLa par des pseudo-particules non-réplicatives mimant la phase précoce du cycle d'infection virale du VIH-1. Afin de comprendre le mécanisme d'action des meilleures molécules sélectionnées, nous avons mis en place un test d'addition des molécules à différents temps post-infection et un test d'assemblage basé sur la technique de FRET-FLIM. La polyprotéine Gag est un précurseur nécessaire et suffisant pour la formation de particules virales mais le mécanisme de sélection de seulement deux copies d’ARN spécifique par virion est encore mal compris. Dans Gag, il y a deux sites d’interaction pour l'ARN. L’un de ces sites est le domaine de nucléocapside (NC), qui contient deux doigts de zinc capables de recruter l’ARN génomique viral. Le second site est constitué par les résidus basiques du domaine Matrice (MA). Ces deux sites peuvent interagir avec l'ARN simultanément et stabiliser la forme compacte de Gag. Pour démontrer in cellulo ce repliement de Gag, nous avons utilisé un système de split-Green Fluorescent Protein (GFP) et combiné différentes techniques de microscopie et de biochimie. Afin de compléter cette étude, le repliement sous forme compacte de différents mutants de Gag qui ont perdu totalement ou partiellement leurs capacités d’interaction avec l'ARN a également été étudié.
Type de contenu : Text
Format : PDF
Entrepôt d'origine : STAR : dépôt national des thèses électroniques françaises
Identifiant : 2017STRAJ020
Type de ressource : Thèse
