Visualisation de protéines individuelles pour la quantification à haute sensibilité du lysat cellulaire
Langue Anglais
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Auteur : Leclerc, Simon
Date de soutenance : 24-08-2018

Directeur(s) de thèse : Arntz, Youri - Taniguchi, Yuichi

Président : Gergely, Csilla
Rapporteur(s) : Gergely, Csilla - Cuisinier, Frédéric
Membre(s) du jury : Arntz, Youri - Taniguchi, Yuichi - Gergely, Csilla - Cuisinier, Frédéric - Vautier, Dominique

Établissement de soutenance : Strasbourg
Laboratoire : Laboratoire de bioimagerie et pathologies (Strasbourg ; 2018-....)
École doctorale : École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
 
Discipline : Biologie moléculaire
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : Molécule individuelle, Marquage du protéome, Protéomique, Microscope à haute sensibilité
Mots-clés :
  • Protéome
  • Sondes fluorescentes
  • Marqueurs biologiques
  • Cellules cancéreuses - Imagerie spectroscopique
  • Bioluminescence
Résumé : La quantification du protéome à très haute sensibilitée n’est actuellement pas réalisable, et est un problème pour l’analyse de cellule isolée, d’échantillon rare ou pour la détection de protéine de faible abondance. Afin d’améliorer la sensibilité, une idée est d’utiliser un microscope capable de détecter des protéines individuellement. Il faut pour cela dans un premier temps mesurer la proportion du protéome actuellement marquée par une sonde fluorescente afin de pouvoir faire des mesures quantitatives. Avec des conditions dénaturantes et la détection des amines, on arrive à marquer jusqu’à 75% du protéome d’un lysat cellulaire, avec un marquage plus efficace quand la protéine est de grande taille. Dans un deuxième temps, il faut séparer par la taille le protéome afin de réaliser un profil protéique. Si la puce microfluidique ne permet pas la réalisation d’un profil avec une résolution, le micro SDS-PAGE en est capable en permettant également l’observation du profil par microscopie, autorisant la détection jusqu’à 10 ng de protéines par bande et ainsi permettant d'obtenir un profil à partir de seulement 100 cellules. Cette sensibilité a permis l’identification de quatre lignées cellulaires de cancer du sein, avec un fort potentiel pour une application pour le diagnostic de cellule cancéreuse provenant de petite biopsie, plus facile pour le patient.
 
Type de contenu : Text
Format : PDF
 
Entrepôt d'origine : STAR : dépôt national des thèses électroniques françaises
Identifiant : 2018STRAJ044
Type de ressource : Thèse