Mise au point d'un système chromatographique permettant de détecter en ligne la présence d’inhibiteurs de l’acétylcholinestérase et de comparer qualitativement leurs activités inhibitrices
Langue Français
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Auteur : Yuan, Ye
Date de soutenance : 06-09-2019
Directeur(s) de thèse : Marchioni, Eric
Établissement de soutenance : Strasbourg
Laboratoire : Institut pluridisciplinaire Hubert Curien (Strasbourg ; 2006-....)
École doctorale : École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....)
Discipline : Chimie analytique
Classification : Chimie, minéralogie, cristallographie, Génie chimique, technologies alimentaires
Mots-clés libres : Réacteur d’enzyme immobilisée, Spectrométrie de masse, Alcaloides, Inhibiteur d’acétylcholinestérase, Dispositif bioanalytique
Mots-clés :
- Anticholinestérasiques
- Acétylcholinestérase
- Inhibiteurs
- Chromatographie en phase liquide à hautes performances
- Spectrométrie de masse
- Lycoris
- Alcaloïdes des Amaryllidaceae
Résumé : Notre projet porte sur la mise au point d’un système chromatographique couplant la chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP), un réacteur d’enzyme immobilisée (IMER) et une détection par spectrométrie de masse (SM) destiné à détecter les inhibiteurs de l’acétylcholinestérase (AChE) et de comparer leurs activités inhibitrices respectives. En utilisant ce couplage, les inhibiteurs d’AChE peuvent être séparés en ligne et leurs activités inhibitrices comparées directement par la simple mesure, par SM, de la surface des pics chromatographiques de l’acétylcholine (ACh) résiduelle, dont l’hydrolyse a été inhibée par les composés recherchés. 3 étalons connus d’inhibiteurs d’AChE (la galanthamine-GL, l’huperzine A-HuA et la tacrine-TA), ont été sélectionnés pour mettre au point les conditions analytiques de ce couplage original. Après avoir validé cette méthode avec les 3 étalons inhibiteurs de l’AChE, les extraits alcaloïdiques de différentes plantes ont été injectés dans le dispositif afin de cribler les nouveaux candidats inhibiteurs de l’AChE. Parmi les extraits injectés, il y des inhibiteurs d’AChE ont pu être découvert grâce à la présence des pics d’ACh. Pour compenser la dérive de la ligne de base chromatographique (m/z 146), due au gradient de phase organique (MeOH), une pompe de contre-gradient a été ajoutée à la sortie de la colonne de CLHP. Les résultats montrent que cet ajout d’une pompe de contre-gradient améliore considérablement l’horizontalité de la ligne de base mais relève celle-ci à des valeurs trop importantes et réduit d’autant la sensibilité du dispositif par rapport à la méthode chromatographique réalisée sans contre-gradient. Cette étude a permis la mise au point d’une méthode innovante en couplant la CLHP, un IMER et une détection par SM destinée au criblage les inhibiteurs de l’AChE. Grace à cette méthode, l’activité des différents inhibiteurs peut être facilement évaluée en mesurant l’aire des pics d’ACh correspondant aux composés recherchés. 3 inhibiteurs connus de l’AChE ont été choisis pour valider cette méthode. Cette dernière a permis de mettre clairement en évidence une relation dose-effet croissante qui lie des pics des inhibiteurs de l’ACh en fonction de leurs quantités injectées. Cette méthode CLHP-IMER-SM a été appliquée au criblage les inhibiteurs de l’AChE dans des extraits de plante. Grâce à cette méthode, un nouvel inhibiteur de l’AChE a été découvert dans l’extrait de Lycoris Radiata.
Type de contenu : Text
Format : PDF
Entrepôt d'origine : STAR : dépôt national des thèses électroniques françaises
Identifiant : 2019STRAF016
Type de ressource : Thèse
