Note ABES Hyphenation of non-denaturing liquid chromatography to native mass spectrometry for therapeutic protein characterization Développement de nouveaux couplages combinant la chromatographie liquide non-dénaturante à la spectrométrie de masse native pour la caractérisation de protéines thérapeutiques Spectrométrie de masse native Chromatographie liquide non-dénaturante Anticorps monoclonaux thérapeutiques Native mass spectrometry Non-denaturing liquid chromatography Therapeutic monoclonal antibodies 547 Anticorps monoclonaux Propriétés physico-chimiques Chromatographie en phase liquide Spectrométrie de masse Ce travail de thèse est focalisé sur le développement de méthodes combinant la chromatographie liquide non dénaturante à la spectrométrie de masse native (MS native) pour la caractérisation de protéines thérapeutiques en particulier des anticorps monoclonaux (mAbs). Les techniques de chromatographies liquides non-dénaturantes (ndLC) sont utilisées avec des phases mobiles comportant des sels non-volatils et donc incompatibles avec la MS native. Dans ce contexte, les développements de nouveaux couplages impliquant la chromatographie d’exclusion stérique (SEC), la chromatographie à échange cationique (CEX), la chromatographie d’interaction hydrophobe (HIC) et la MS native ont été réalisés. Le couplage de la SEC à la MS native a permis d’identifier et de quantifier les variants de tailles de mAbs. Le couplage CEX-MS native permet l’identification et la quantification des variants de charges de mAbs. Enfin, le couplage direct de la HIC à la MS native a permis de caractériser les anticorps immunoconjugués à cystéine. L’ensemble des développements méthodologiques réalisés au cours de ce travail de thèse ont permis de démontrer le bénéfice des couplages ndLC-MS native. This thesis work focuses on the development of analytical methods hyphenating the non-denaturing liquid chromatography and native mass spectrometry (native MS) for therapeutic protein characterization, especially for monoclonal antibodies (mAbs). Non-denaturing liquid chromatography (ndLC) techniques are performed by using mobile phases composed of non-volatile salts and inherently not compatible with native MS. In that context, the developments of new couplings involving size exclusion chromatography (SEC), cation exchange chromatography (CEX), hydrophobic interaction chromatography (HIC) and native MS were realized. The hyphenation of SEC to native MS allowed the identification and quantification of mAb size variants. Moreover, CEX hyphenated to native MS provided an identification and quantification of mAb charge variants. Finally, the hyphenation between HIC and native MS allowed the characterization of cysteine-linked antibody-drug conjugates. Consequently, the benefit of non-denaturing liquid chromatography hyphenated to native MS was outlined throughout this thesis work. Electronic Thesis or Dissertation Text en PDF 18756243 Université de Strasbourg Strasbourg 2021-12-31 application/pdf https://publication-theses.unistra.fr/restreint/theses_doctorat/2019/Ehkirch_Anthony_2019_ED222.pdf Ehkirch Anthony 1993-03-27 FR 257776133 https://theses.fr/2019STRAF048 2019STRAF048 https://doi.org/10.70675/94501199z1059z4dbez9356za0cd21ee3d9c 2019-11-22 Chimie analytique Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Cianférani-Sanglier Sarah MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 070341222 Guillarme Davy MADS_PRESIDENT_DU_JURY 084318554 Cianférani-Sanglier Sarah MADS_MEMBRE_DU_JURY_1 070341222 Guillarme Davy MADS_MEMBRE_DU_JURY_2 084318554 Sobott Frank MADS_MEMBRE_DU_JURY_3 223497185 Vilaseca Marta MADS_MEMBRE_DU_JURY_4 257777040 Bitsch Francis MADS_MEMBRE_DU_JURY_5 197204244 Sobott Frank MADS_RAPPORTEUR_1 223497185 Vilaseca Marta MADS_RAPPORTEUR_2 257777040 École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 156504081 Institut pluridisciplinaire Hubert Curien (Strasbourg ; 2006-....) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 157760502 93777 ddc:540 Sanglier Sarah Guillarme Davy Sanglier Sarah Guillarme Davy Sobott Frank Vilaseca Marta Bitsch Francis Sobott Frank Vilaseca Marta École doctorale Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....) Institut pluridisciplinaire Hubert Curien (Strasbourg) PDF 18756243 confidentialité 2019-11-22 2021-01-01 confidentialité 2019-11-22 2021-01-01 confidentialité 2019-11-22 2021-01-01