Suivi du changement conformationel de protéines membranaires de la chaîne respiratoire par sondes infrarouge
Langue Anglais
Ce document est protégé en vertu du Code de la Propriété Intellectuelle.
Auteur : Santos Seiça, Ana Filipa
Date de soutenance : 11-12-2019
Directeur(s) de thèse : Hellwig, Petra
Établissement de soutenance : Strasbourg
Laboratoire : Chimie de la matière complexe (Strasbourg)
École doctorale : École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....)
Discipline : Chimie
Classification : Chimie, minéralogie, cristallographie, Sciences de la vie, biologie, biochimie
Mots-clés libres : Marqueurs infrarouge, Complex I, GlcPSe, LacY, SEIRAS, Surface d’or, F1FO-ATPase
Mots-clés :
- Protéines membranaires
- Analyse conformationnelle
- Spectroscopie infrarouge
- Sondes moléculaires
Résumé : Dans cette thèse 2, différentes bandes marqueurs en infrarouge de la protéine ont été étudiées, la ν(C=O) Asp/Glu entre 1730-1750 cm-1 et la ν(SC≡N) entre 2175-2120 cm-1 par spectroscopie infrarouge exaltée de surface. Les sondes infrarouges ont été introduites dans les protéines membranaires de la chaîne respiratoire. Ainsi les grands mouvements des domaines protéiques gouvernant les mécanismes catalytiques ont été contrôlés par les spectroscopies vibrationnelles à l'aide d’une réaction induite. Avant d'étudier les marqueurs infrarouges, il était nécessaire de comprendre, d’une part, l'influence de la morphologie de la surface d’or nanostructurée et d’autre part, l’effet de la procédure d'immobilisation des protéines sur le facteur d'amélioration des signaux protéiques en infrarouge. Deux méthodes d'immobilisation ont été utilisées pour caractériser des cristaux de silicium après dépôt de nanoparticules métalliques à des temps de dépôt différents. La première protéine marquée par une sonde infrarouge est la F1FO-ATPase d’Escherichia coli, composée de deux parties distinctes reliées par deux tiges. Il y a des études révélant la participation de la sous-unité epsilon (ε) dans la production de l'ATP. Cette sous-unité a été observée en deux conformations différentes en fonction des conditions expérimentales, cependant, il n'y a aucune preuve directe. Le signal thiocyanate a été étudié en présence et en absence d'ATP dans les deux protéines mutantes situées dans différentes positions de la sous-unité ε. La deuxième protéine étudie c’était le Complex I. Le mouvement de la sonde infrarouge nitrile, petite et très flexible a été attaché à l'hélice amphipathique située dans le bras membranaire de E coli. Complexe I. Nous avons permis de démontrer une nouvelle façon d'identifier les changements conformationnels dans cette enzyme. Le deuxième sonde étudié en infrarouge correspond à la ν(C=O) du glucose Staphylococcus epidermidis/H+ symporteur (GlcPSe) et Lactose Permease (LacY) d’Escherichia Coli. La spectroscopie d'absorption infrarouge d’exaltation de surface (SEIRA) a été utilisée pour étudier les changements conformationnels de la GlcPSe et LacY immobilisée à la surface et liée d’une manière dépendante au pH- et au glucose. Les résultats ont révélé que l’Asp22 de GlcPSe possède un pKa de 8.5 en présence et en absence du glucose. Pour la protéine LacY, l'importance critique de Glu325 et la possibilité que l'Arg302 puisse être important pour la déprotonation, a été étudié pour les mutants dans le voisinage immédiat de Glu325
Type de contenu : Text
Format : PDF
Entrepôt d'origine : STAR : dépôt national des thèses électroniques françaises
Identifiant : 2019STRAF064
Type de ressource : Thèse
