Note ABES Synthèse chimique de protéines pour étudier les structures et les fonctions d’un complexe formé par des protéines intrinsèquement désordonnées Chemical synthesis of protein to study the structures and functions of a complex formed by intrinsically disordered proteins Protéines intrinsèquement désordonnées Synthèse chimique de protéine Études biophysiques Cristallographie Intrinsically disordered protein Chemical synthesis of protein Biophysical studies Crystallography 541.36 548 572.6 Synthèse protéique Repliement des protéines Dynamique moléculaire Équilibre thermodynamique Cristallographie Protéines intrinsèquement désordonnées Dissertation universitaire La protéine intrinsèquement désordonnée AD1-ACTR se lie avec une forte affinité au globule fondu NCBD en formant un complexe bien structuré. L'incorporation d'acides aminés α-méthylés par Fmoc-SPPS et NCL a été réalisée sur AD1-ACTR et NCBD à différentes positions. Ceci a modifié la conformation des variants AD1-ACTR à l'état libre et a aussi le profil énergétique du repliement induit lors de la liaison avec NCBD. Le contenu en hélice a été estimé à l'aide des spectroscopies RMN et CD. Les thermodynamiques et cinétiques de la formation du complexe ont été mesurées par ITC et SPR. Des variants se liant plus fort au NCBD ont été obtenus et étudiés en détail. La première structure du complexe a été obtenue en utilisant la protéine de fusion MBP-NCBD. La cristallographie racémique aux rayons X a donné des structures à haute résolution (1,15 Å). L'incorporation d'acides aminés α-méthylés conduit à une augmentation du contenu en hélice α qui joue un rôle clé dans la formation du complexe. The intrinsically disordered protein AD1-ACTR binds with high affinity to the molten globule NCBD forming a structured complex composed of six α-helices. The incorporation of conformationally constrained α-methylated amino acids was performed on AD1-ACTR and NCBD at multiple sites using Fmoc-SPPS and NCL. It modified the conformation of AD1-ACTR variants in the free state and altered the energetic landscape of binding-induced folding with NCBD. Changes in α-¬helical content upon α-methylation were estimated using NMR and CD spectroscopies. Thermodynamics and kinetics of the complex formation were measured by ITC and SPR. AD1-ACTR best binders toward NCBD were obtained and studied in more details. The first crystal structure of the complex was obtained using MBP-NCBD fusion protein. Racemic X-ray crystallography yielded high resolution structures (1.15 Å). The incorporation of α-methylated amino acids leads to increased α-helical content that played key roles for the complex formation. Electronic Thesis or Dissertation Text en PDF 8311548 Université de Strasbourg Strasbourg 2021-12-31 application/pdf 8181181 http://www.theses.fr/2020STRAF009/document/ https://theses.fr/2020STRAF009/abes Bauer Valentin 1994-05-20 FR 255974515 https://theses.fr/2020STRAF009 2020STRAF009 https://doi.org/10.70675/c09a020fz2e41z4ed2zb024zdb729f3b211c 2020-09-24 Chimie Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Torbeev Vladimir MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 231409664 Zuber Guy MADS_PRESIDENT_DU_JURY 115684344 Schuler Benjamin MADS_RAPPORTEUR_1 25597647X Miclet Emeric MADS_RAPPORTEUR_2 194674401 École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 156504081 Institut de science et d’ingénierie supramoléculaires (Strasbourg) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 157760227 207480 ddc:540 ddc:570 Torbeev Vladimir Zuber Guy Schuler Benjamin Miclet Emeric École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....) Institut de science et d’ingénierie supramoléculaires (Strasbourg) PDF 8311548 confidentialité 2020-09-24 2028-09-24 confidentialité 2020-09-24 2028-09-24 confidentialité 2020-09-24 2028-09-24 confidentialité 2020-09-24 2028-09-24