Note ABES Mécanismes moléculaires impliqués lors de la commutation isotypique Molecular mechanisms involved during class switch recombination Commutation isotypique Hypermutation somatique Fam72a Ung Crible CRISPR/Cas9 à l’échelle du génome Class switch recombination Somatic hypermutation Fam72a Ung Genome-scale CRISPR/Cas9 screening 571.96 Commutation isotypique Aspect moléculaire Immunologie Au cours des réponses immunes, le répertoire des cellules B est diversifié par l’hypermutation somatique (HMS) et la commutation isotypique (CI). Ces mécanismes sont initiés par l’enzyme Activation-induced cytidine deaminase (AID) qui induit des dommages à l’ADN. La CI a lieu au sein du locus IgH et implique un événement de recombinaison longue distance au niveau des régions de switch. Mécaniquement, elle est initiée par la désamination des cytosines dans l’ADN en uraciles par AID. Ces uraciles sont principalement excisés par l’Uracil DNA Glycosylase (UNG), ce qui entraîne la génération de cassures double brin. Celles-ci activent la réponse des dommages de l’ADN puis, sont réparées par la voie de jonction des extrémités non homologues (NHEJ). Dans le but d’identifier les acteurs moléculaires impliqués lors de la CI, nous avons réalisé un criblage CRISPR/Cas9 à large échelle et identifié Fam72a, un gène codant pour une protéine mal caractérisée se liant à Ung2. Nous avons montré que Fam72a est requis pour une CI et une HMS efficace, probablement par sa participation au choix entre la réparation fidèle ou mutagène en réponse aux uraciles induits par AID. De plus, nous avons caractérisé le rôle de Zbtb24 et de l’enhancer putatif γ1E lors de la commutation isotypique. L’ensemble de ces travaux permet d’éclaircir les différents mécanismes moléculaires impliqués dans la régulation des processus de diversification des immunoglobulines. During immune responses, B cell repertoire is diversified through somatic hypermutation (SHM) and class switch recombination (CSR). These mechanisms are initiated by the enzyme Activation-induced cytidine deaminase (AID) which induces DNA damage. CSR takes place within the IgH locus and involves a long-range recombination event at the switch regions. Mechanistically, CSR is initiated by the deamination of cytosines in DNA into uracils by AID. These uracils are mainly removed by the Uracil DNA Glycosylase (UNG) and are then processed into double-stranded DNA breaks (DSBs). These DSBs activate the DNA damage response and are then repaired by the Non-Homologous End Joining (NHEJ) pathway. In order to identify the molecular actors involved in CSR, we performed a large-scale CRISPR/Cas9 screening and identified Fam72a, a gene which encodes a poorly characterized protein that has been shown to associate with Ung2. We showed that Fam72a is required for efficient CSR and SHM, probably by its involvement in the choice between faithful or mutagenic repair in response to AID-induced uracils. In addition, we characterized the role of Zbtb24 and the putative 1E enhancer during CSR. All this work allows us to shed light on the different molecular mechanisms involved in the regulation of immunoglobulin diversification processes. Electronic Thesis or Dissertation Text fr PDF 13015258 Université de Strasbourg Strasbourg 2022-12-31 https://theses.hal.science/tel-04416348 application/pdf https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2020/Rogier_Melanie_2020_ED414.pdf http://www.theses.fr/2020STRAJ085/abes https://theses.hal.science/tel-04416348 https://theses.hal.science/tel-04416348 https://theses.hal.science/tel-04416348 https://theses.hal.science/tel-04416348 Rogier Mélanie 1990-01-31 FR 261579363 https://theses.fr/2020STRAJ085 2020STRAJ085 https://doi.org/10.70675/a2f14017z0f29z4113zb2b3z2a12de0ae91a 2020-12-14 Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie - Immunologie Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Reina-San-Martin Bernardo MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 158368010 Soulas-Sprauel Pauline MADS_PRESIDENT_DU_JURY 085916390 085916390 Khamlichi Ahmed Amine MADS_RAPPORTEUR_1 077501209 077501209 Roulland Sandrine MADS_RAPPORTEUR_2 083611061 École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 156502844 Institut de génétique et de biologie moléculaire et cellulaire (Strasbourg) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 155263749 93800 ddc:570 Reina-San-Martin Bernardo Soulas-Sprauel Pauline Khamlichi Ahmed Amine Roulland Sandrine École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) Institut de génétique et de biologie moléculaire et cellulaire (Strasbourg) PDF 13015258 confidentialité 2020-12-14 2023-12-14 confidentialité 2020-12-14 2023-12-14 restriction 2020-12-14 2023-12-14 confidentialité 2020-12-14 2023-12-14 confidentialité 2020-12-14 2023-12-14