Note ABES Structural and functional studies of S.aureus translation machinery Études structurelles et fonctionnelles de la machine de synthèse protéique du S.aureus Résistance aux antimicrobiens Staphylococcus aureus Traduction Ribosome EF-P Synthèse de protéines cell-free Antimicrobial resistance Staphylococcus aureus Translation Ribosome EF-P Cell-free protein synthesis 572.8 571.4 Synthèse protéique Infections à staphylocoque doré Résistance aux médicaments Traduction génétique La résistance aux antimicrobiens est devenue l'un des plus grands problèmes mondiaux. La résistance croissante aux antimicrobiens nous oblige à rechercher de nouveaux médicaments et stratégies de traitement. Parmi les bactéries pathogènes, Staphylococcus aureus est l'une des principales causes d'infections nosocomiales. Comme la majorité des antibiotiques ciblent la machinerie de synthèse des protéines, la connaissance de sa structure détaillée est cruciale pour le développement de médicaments. Dans cette thèse, nous rapportons la reconstruction cryo-EM à une résolution de 3,2Å du ribosome du S.aureus avec l'ARNt du site P, l'ARN messager et dix sites de modification de l'ARNr auparavant non attribués ou visualisés. Nous avons également déterminé la solution et la structure cristalline du Elongation factor P (EF-P) du S.aureus à une résolution de 1.48Å et trouvé la modification 5-aminopentanol EF-P par spectrométrie de masse. EF-P est un facteur protéique d'élongation hautement conservé qui joue un rôle important dans la synthèse des protéines et la virulence des bactéries - il pourrait servir de cible thérapeutique potentielle pour la stratégie de conception de médicaments anti virulents. Dans la thèse, nous décrivons également la création et l'optimisation du système cell-free de traduction de protéines du S.aureus. Le système créé pourrait servir de plate-forme de criblage pour les tests d'inhibition et d'activité protéique. Tous les résultats obtenus pourraient servir de base à de futures études de développement de médicaments. Antimicrobial resistance has become one of the biggest worldwide problems. The growing antimicrobial resistance forces us to search for new drugs and treatment strategies. Among pathogenic bacteria, Staphylococcus aureus is one of the leading causes of healthcare-acquired infections. As the majority of antibiotics target protein synthesis machinery, knowledge of its detailed structure is crucial for drug development. In this thesis we report the Cryo-EM reconstruction at 3.2Å resolution of S.aureus ribosome with P-site tRNA, messenger RNA, and ten rRNA modification sites previously not assigned or visualized. Also we determined the solution and crystal structure of S.aureus Elongation factor P (EF-P) at 1.48Å resolution and found EF-P's 5-aminopentanol modification by mass spectrometry. EF-P is a highly conserved elongation protein factor that plays an important role in protein synthesis and bacteria virulence - it could serve as a potential drug target for antivirulence drug design strategy. In the thesis we also describe creation and optimization of S.aureus cell-free protein translation system. The created system could serve as a screening platform for inhibition and protein activity assays. All obtained results could be used as a foundation for future drug development studies. Electronic Thesis or Dissertation Text en PDF 5439627 Université de Strasbourg Strasbourg 2022-12-31 application/pdf https://publication-theses.unistra.fr/restreint/theses_doctorat/2021/GOLUBEV_Aleksandr_2021_ED414.pdf Golubev Aleksandr 1991-09-27 FR 260963453 0EFB1T05HQ8 21823176 4200047 https://theses.fr/2021STRAJ054 2021STRAJ054 https://doi.org/10.70675/f46f5ce6z99d0z48d9z83d7zd267ddd6149b 2021-11-02 Biophysique et biologie structurale Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Yusupov Marat MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 138514534 Romby Pascale MADS_PRESIDENT_DU_JURY 031545009 Spahn Christian MADS_MEMBRE_DU_JURY_1 260963658 Mourey Lionel MADS_RAPPORTEUR_1 095119418 Schmitt Emmanuelle MADS_RAPPORTEUR_2 164047573 École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 414 156502844 Institut de génétique et de biologie moléculaire et cellulaire (Strasbourg) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 155263749 ddc:570 Yusupov Marat Romby Pascale Spahn Christian Mourey Lionel Schmitt Emmanuelle École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) Institut de génétique et de biologie moléculaire et cellulaire (Strasbourg) PDF 5439627 confidentialité 2021-11-02 2022-11-02 confidentialité 2021-11-02 2022-11-02 confidentialité 2021-11-02 2022-11-02