Effets des immunosuppresseurs et des microparticules membranaires sur la transition épithélio-mésenchymateuse des cellules épithéliales bronchiques en culture 2D et 3D : intérêt en transplantation pulmonaire
Langue Français
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Auteur : Gracyasz, Margaux
Date de soutenance : 03-12-2021
Directeur(s) de thèse : Kessler, Romain - Olland, Anne
Établissement de soutenance : Strasbourg
Laboratoire : Regenerative NanoMedicine (Strasbourg ; 2018-2022)
École doctorale : École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
Discipline : Pharmacologie-pharmacocinétique
Classification : Médecine et santé, Sciences de la vie, biologie, biochimie
Mots-clés libres : Bronchiolite oblitérante, Transplantation pulmonaire, Traitement immunosuppresseur, Transition épithélio-mésenchymateuse
Mots-clés :
- Transition épithélio-mésenchymateuse
- Transplantation pulmonaire
- Immunosuppresseurs
Résumé : La bronchiolite oblitérante (BO) est caractérisée par un remodelage anormal de l’épithélium bronchique causant une oblitération fibreuse de la bronchiole. Un des mécanismes impliqués est la transition épithélio-mésenchymateuse (TEM). La TEM pourrait être favorisée par des facteurs allo-immuns (infections) ou non-allo-immuns (Immunosuppresseur (IS)). Cette étude s’intéresse à l’impact d’un facteur non-immuns, les IS et plus particulièrement le Tacrolimus (TAC) et Everolimus (EVE). Le développement d’un modèle 3D est nécessaire pour mieux comprendre les interactions cellulaires et le phénomène de TEM induite par les IS. Méthodes. BEAS-2B, cellules épithéliales bronchique sont soumis à TAC (1-20μM), EVE (0,1nM-1μM) et à un stress pro-inflammatoire (microparticules pro-inflammatoires, MPs) (30nM) pendant 72 h. Les MPs sont obtenus par la stimulation des monocytes THP-1 par le lipopolyssacharide de Pseudomonas aeruginosa. La morphologie cellulaire a été analysé par microscopie otique et confocal, analyses des marqueurs épithéliaux et mésenchymateux par western blot et de la capacité migratoire par scratch test. Pour la formation de sphéroïdes, 3 concentrations de cellules 10 000, 50 000 et 100 000 cellules ont été utilisées. Les sphéroïdes ont été analysées après 7 jours d’incubation au microscope optique et confocal. Résultats : les cellules traitées par TAC and EVE ont modifié leur morphologie cellulaire et ont un profil mésenchymateux avec une baisse significative de la E-cadhérine avec TAC10μM and EVE0.,1nM comparé au cellules non traitées (p<0,0001) et (p<0,001) respectivement et une augmentation significative de la vimentine avec TAC10μM et EVE0,1nM comparé aux cellules non traitées (p=0,0005)et (p<0,05) respectivement. Les sphéroïdes à 10 000, 50 000 et 100 000 cellules ont un diamètre de250μm, 520μm et 620μm respectivement. A 100 000 cellules, la partie distale es sphéroïdes expriment de la vimentine, alors que le reste expriment la E-cadhérine. Conclusion : In vitro, le TAC et EVE combiné aux MPs pro-inflammatoires conduit en faveur d’une exagération de la TEM. Le prescripteur pourrait considérer la statue inflammatoire du patient transplanté. Le modèle 3D permettra d’avoir une présentation plus fidèle afin d’étudier les effets des IS des médicaments en diffusant par voie basale et non apicale.
Type de contenu : Text
Format : PDF
Entrepôt d'origine : STAR : dépôt national des thèses électroniques françaises
Identifiant : 2021STRAJ070
Type de ressource : Thèse
