Note ABES Évaluation de polymères amphiphiles pour l’extraction, la purification et la caractérisation de protéines membranaires d’intérêt thérapeutique Evaluation of amphiphilic polymers for the extraction, purification and characterization of membrane proteins of therapeutic interest Protéines membranaires eucaryotes Pichia pastoris Polymères amphiphiles Solubilisation Purification Caractérisation moléculaire Eukaryotic membrane protein Pichia pastoris Amphipathic polymers Solubilization Purification Molecular characterization 572.696 660.6 Protéines membranaires Emploi en thérapeutique Composés amphiphiles Surfactants biologiques Au cours de deux dernières décennies, des approches alternatives à l’utilisation de détergents ont été développées pour l’étude de protéines membranaires en solution, dans le but de reproduire un environnement lipidique plus stable et plus proche des membranes biologiques. Récemment, de nouveaux polymères amphiphiles ont ainsi été décrits avec la capacité de déstabiliser les membranes biologiques et de générer des nanoparticules lipidiques contenant les protéines d’intérêt. Si cette approche semble particulièrement prometteuse, peu de données sont disponibles quant à l’obtention et à l’étude de telles particules contenant des protéines membranaires eucaryotes produites dans des systèmes d’expression eucaryotes, et en particulier dans la levure Pichia pastoris. L’objet de cette étude est d’évaluer l’efficacité de ce type de polymères pour l’extraction et la purification de deux protéines modèles produites dans le système P. pastoris, à savoir le récepteur à l’adénosine A2A et le canal perméable au calcium Transient Receptor Vanilloid 4 (TRPV4). En comparaison avec des approches basées sur les détergents, notre but est d’évaluer la performance de ces molécules dans le cadre d’études fonctionnelles et structurales de ces protéines membranaires en solution. Within the last two decades, alternative approaches to detergent have been developed for the study of membrane proteins in solution, with the goal to better mimic the natural lipidic environment of the membrane and to improve the stability of the protein. Recently, new amphipathic polymers have been described for their effective capacity to isolate membrane proteins of interest within nanolipidic particles. Although this approach seems particularly promising, few data are available regarding the generation and the study of such particles containing eukaryotic membrane proteins produced with eukaryotic expression systems, and in particular with the yeast Pichia pastoris.The aim of this study is thus to evaluate the performance of such polymers for the extraction and purification of two model membrane proteins produced in the P. pastoris system, namely the adenosine A2A receptor and the calcium permeant channel Transient Receptor Potential Vanilloid 4 (TRPV4). In comparison with detergent-based approaches, we investigate the suitability of such molecules for the isolation and functional and structural characterization of these two membrane proteins. Electronic Thesis or Dissertation Text fr PDF 10474759 Université de Strasbourg Strasbourg 2022-12-31 https://theses.hal.science/tel-03708338 application/pdf 10500071 https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2022/Guyot_Lucile_2022_ED414.pdf http://www.theses.fr/2022STRAJ010/abes https://theses.hal.science/tel-03708338 https://theses.hal.science/tel-03708338 https://theses.hal.science/tel-03708338 https://theses.hal.science/tel-03708338 Guyot Lucile 1995-11-08 FR 263254518 0706017766R 21509524 4200047 https://theses.fr/2022STRAJ010 2022STRAJ010 https://doi.org/10.70675/cbbd08f6z8898z42b7z90f6zf8fa08115fd1 2022-01-28 Biotechnologies Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Wagner Renaud MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 184545153 Grutter Thomas MADS_PRESIDENT_DU_JURY 170545598 Zoonens Manuela MADS_RAPPORTEUR_1 089018273 Banères Jean-Louis MADS_RAPPORTEUR_2 159007933 École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 414 156502844 Biotechnologie et signalisation cellulaire (Strasbourg ; 2011-....) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 157715205 207563 ddc:570 ddc:660 Wagner Renaud Grutter Thomas Zoonens Manuela Banères Jean-Louis École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) Biotechnologie et signalisation cellulaire (Strasbourg) PDF 10474759