Note ABES From functional study of tRNA CCA-adding enzymes toward their characterization by serial X-ray crystallography De l’analyse fonctionnelle d’ARNt nucléotidyltransférases vers leur caractérisation par cristallographie sérielle sous rayonnement X Cristallographie aux rayons X Cristallographie sérielle ARNt nucléotidyltransférase Cristallisation Macromolécules biologiques Xtal Controller Organisme psychrophile X-ray crystallography Serial crystallography TRNA nucleotidyltransferase Macromolecule crystallization Xtal Controller Psychrophilic organism 572.8 572.7 548 Radiocristallographie ARN de transfert Complexes multienzymatiques Structure La dernière décennie marque d'importantes évolutions dans le domaine de la biologie structurale, en particulier dans la cristallographie sérielle aux rayons X résolue en temps. L’objectif de cette thèse en cotutelle entre les universités de Strasbourg et de Leipzig, était d’appliquer cette approche à la caractérisation fonctionnelle et structurale de trois CCA-adding enzymes. En combinant résultats biochimiques et méthodes de cristallisation avancées, nous avons pu : 1) déterminer l'affinité de liaison de nos candidats à divers substrats ainsi que les propriétés cinétiques des réactions catalysées , 2) obtenir des conditions reproductibles de production de cristaux pour les analyses standard et SSX,3) suivre les événements de nucléation et contrôler la cristallisation de certaines enzymes grâce au Xtal Controller, 4) acquérir des données sérielles in situ à température ambiante en puce microfluidique, 5) résoudre la structure d’une cible dans sa forme apo ou en complexe avec un ligand. The last decade has seen important developments in the field of structural biology, in particular in time-resolved serial X-ray crystallography (TR-SSX). The objective of this thesis, in cotutelle between the universities of Strasbourg and Leipzig, was to apply this approach to the functional and structural characterization of three CCA-adding enzymes. By combining biochemical results and advanced crystallization methods, we were able to: 1) determine the binding affinity of our candidates to various substrates as well as the kinetic properties of the catalyzed reactions, 2) obtain reproducible crystal production conditions for standard and SSX analyses, 3) monitor nucleation events and control the crystallization of selected enzymes using the Xtal Controller, 4) acquire serial data in situ at room temperature in microfluidic chip, 5) resolve the structure of a target in its apoform or in complex with a ligand. Electronic Thesis or Dissertation Text en PDF 53557344 Université de Strasbourg Strasbourg 2023-12-31 https://theses.hal.science/tel-04007567 application/pdf 53251842 https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2022/Rollet_Kevin_2022_ED414.pdf https://theses.fr/2022STRAJ014/abes https://theses.hal.science/tel-04007567 https://theses.hal.science/tel-04007567 Rollet Kévin 1994-12-30 FR 258348496 1505012724W 21207177 4200047 https://theses.fr/2022STRAJ014 2022STRAJ014 https://doi.org/10.70675/bf6d0723z46ebz4314z8304zf2d7dd20292c 2022-03-17 Biophysique et biologie structurale Strasbourg 131056549 Universität Leipzig MADS_ETABLISSEMENT_DE_COTUTELLE_1 02645856X Doctorat Docteur es non oui Sauter Claude MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 142349844 Mörl Mario MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_2 204249317 Schultz Patrick MADS_PRESIDENT_DU_JURY 060895500 Coin Irene MADS_MEMBRE_DU_JURY_1 265905796 Ledu Marie-Hélène MADS_RAPPORTEUR_1 147734703 Schneider André MADS_RAPPORTEUR_2 265913675 École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 414 156502844 Architecture et réactivité de l'ARN (Strasbourg ; 1992-....) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 157545687 93780 ddc:570 ddc:540 Universität Leipzig Sauter Claude Mörl Mario Schultz Patrick Coin Irene Ledu Marie-Hélène Schneider André École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) Architecture et réactivité de l'ARN (Strasbourg ; 1992-....) PDF 53557344