Note ABES Développement de nouvelles méthodes de conjugaison chimiques pour la modification site-sélective de protéines natives Development of new chemical strategies for the site selective conjugation of native proteins Anticorps Bioconjugaison Réactions multicomposantes Anticorps bispécifiques Antibodies Bioconjugation Multicomponent reactions Bispecific antibodie 572 Anticorps Anticorps bispécifiques Chimie pharmaceutique La modification chimique de protéines a été largement étudié lors des dernières décennies, en particulier dans le domaine thérapeutique. Les protéines étant des poly- nucléophiles, leur modification homogène demeure un défi majeur du domaine. Les travaux présentés ici proposent de cibler en même temps deux résidus d’une protéine via la réaction de Ugi. Ainsi la protéine est utilisée à la fois comme source d’amine primaire et d’acide carboxylique. Après introduction de diverses combinaisons d’isocyanides et d’aldéhydes dans le milieu, la formation de l’adduit attendu a pu être observé mais sa formation s’est avéré être en compétition avec un adduit intra-résidu au niveau des aspartates et glutamates N-terminaux des anticorps monoclonaux utilisés. Une étude mécaniste approfondie nous a permis de développer des conditions permettant la modification exclusive des résidus E1 et D1. Ensuite, nous avons illustré l’intérêt d’un tel niveau de sélectivité en produisant de manière rapide et homogène des complexes de haut poids moléculaire tels que des anticorps bispécifiques. The development of chemical methods for the site-selective modification of proteins have been widely investigated for the past decades, especially in the therapeutic field. Because of their poly-nucleophilic nature, site-selective modification of proteins can be highly challenging and careful choice of the targeted amino acid(s) must be made. We recently developed an Ugi based dual residue targeting strategy for the labeling of human and humanized mAbs. In our case the mAb is used as source for both primary amine and carboxylic acid and the introduction of various isocyanides and aldehydes in the media led to the formation of the expected inter residue adduct in competition with an intra residue adduct on the highly conserved N-terminal aspartates and glutamates residues. In depth mechanistic study of the reaction allowed to develop N-ter selective conditions. Then, we showed that such selectively labeled mAb allowed the rapid and efficient formation of high molecular weight complexes such as bispecific antibodies. More precisely we managed to form a bispecific T cell engager which showed great occupancy of both target receptors and good cytotoxic activity. Electronic Thesis or Dissertation Text en PDF 107601907 Université de Strasbourg Strasbourg 2024-12-31 https://theses.hal.science/tel-04535583 application/pdf https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2023/Vaur_Valentine_2023_ED222.pdf http://www.theses.fr/2023STRAF065/abes https://theses.hal.science/tel-04535583 https://theses.hal.science/tel-04535583 https://theses.hal.science/tel-04535583 https://theses.hal.science/tel-04535583 https://theses.hal.science/tel-04535583 Vaur Valentine 1996-06-25 FR 276630351 2507021035P 21805604 4200003 https://theses.fr/2023STRAF065 2023STRAF065 https://doi.org/10.70675/2fc14275z3d04z4ef0za805zd4c321b86971 2023-10-24 Chimie biologique et thérapeutique Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Chaubet Guilhem MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 177127732 Viaud-Massuard Marie-Claude MADS_PRESIDENT_DU_JURY 06088956X Hernandez Alba Oscar MADS_MEMBRE_DU_JURY_1 182478238 Maruani Antoine MADS_MEMBRE_DU_JURY_2 276631978 Wagner Alain MADS_MEMBRE_DU_JURY_3 127880518 Viaud-Massuard Marie-Claude MADS_RAPPORTEUR_1 06088956X Albada Hendrik Bauke MADS_RAPPORTEUR_2 276630602 École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 222 156504081 Chémo-biologie synthétique et thérapeutique (Strasbourg ; 2009-....) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 157555011 207315 ddc:570 Chaubet Guilhem Viaud-Massuard Marie-Claude Hernandez Alba Oscar Maruani Antoine Wagner Alain Viaud-Massuard Marie-Claude Albada Hendrik Bauke École doctorale Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....) Conception et application de molécules bioactives (Strasbourg) PDF 107601907 restriction 2023-10-24 2024-02-01 restriction 2023-10-24 2024-02-01