Observation et caractérisation d’une conformation compacte de la protéine Gag du VIH-1 en cellules et étude de la stabilité de la protéine de nucléocapside NCp7 du VIH-1 in vitro et en cellules
Langue Français
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Modalités de diffusion de la thèse :
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Thèse confidentielle jusqu'au 23/11/2024.
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Thèse soumise à l'embargo de l'auteur jusqu'au 23/11/2024 (communication intranet).
Auteur : Zeiger, Manon
Date de soutenance : 23-11-2023
Directeur(s) de thèse : Didier, Pascal
Établissement de soutenance : Strasbourg
Laboratoire : Laboratoire de bioimagerie et pathologies (Strasbourg ; 2018-....)
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
Discipline : Virologie : aspects moléculaires et médicaux
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie
Mots-clés libres : VIH-1, Gag, Forme compacte, NCp7, Protéases cellulaires
Mots-clés :
- Protéines virales
- Interactions ARN-protéine
- Infections à VIH
- Aspect moléculaire
Résumé : La protéine Gag du VIH-1 est nécessaire et suffisante aux étapes d’assemblage et de bourgeonnement du cycle viral. Durant ces étapes, elle est capable de sélectionner spécifiquement deux copies de l’ARN génomique viral (ARNv) pour permettre leur encapsidation dans les nouvelles particules virales. Cette spécificité de sélection est encore mal comprise. Le précurseur Gag possède six domaines dont deux sont capables d’interagir avec l’ARNv : les domaines matrice (MA) et nucléocapside (NC). Une des hypothèses proposées pour expliquer la spécificité de sélection de l’ARNv suggère que Gag serait capable d’adopter une forme compacte afin d’interagir avec cet ARNv via ses domaines MA et NC simultanément. Afin d’étudier l’existence de cette conformation de Gag en cellules, nous avons utilisé la stratégie de split-GFP bipartite pour étudier GagWT ainsi que différents mutants de la protéine dont le repliement sous une forme compacte est affecté. Nous avons également étudié la capacité de production de Virus-Like Particles (VLP) et de vecteurs lentiviraux infectieux de GagWT ainsi que de différents mutants affectant le plus fortement la conformation compacte de Gag. La protéine de nucléocapside NCp7 du VIH-1 est responsable de différentes fonctions durant le cycle viral, d’abord lors de la phase précoce en tant que protéine mature NCp7 puis durant la phase tardive en tant que domaine NC de la protéine Gag. Ses nombreuses fonctions en font une cible intéressante pour le développement de nouveaux traitements. Malgré cela, la protéine NCp7 est peu étudiée. De plus, lorsqu’elle est étudiée dans un contexte viral ou cellulaire, elle est le plus souvent surexprimée et fusionnée à une étiquette pour permettre sa détection. Or, au laboratoire, nous avons observé que le marquage de NCp7 diminue l’infectiosité des particules virales. Nous avons également constaté que la présence d’une étiquette semble stabiliser la protéine. Nous avons décidé d’étudier la stabilité de la protéine NCp7 en présence de protéases cellulaires. Cette étude nous a permis de constater la dégradation de NCp7 en présence de protéases cellulaires. Nous avons également utilisé différents inhibiteurs de protéases afin d’identifier les protéases impliquées. Le protéasome a été identifié et son implication dans la dégradation de NCp7 a été étudiée plus en détails.
Type de contenu : Text
Format : PDF
Entrepôt d'origine : STAR : dépôt national des thèses électroniques françaises
Identifiant : 2023STRAJ110
Type de ressource : Thèse
