Note ABES Etude de la métalloenzyme IspH, une cible pour le développement de nouveaux agents antibactériens Investigation of the IspH metalloenzyme, a target for the development of novel abtibacterial agents Metalloenzyme Catalyse enzymatique IspH LytB E. coli [4Fe-4S]2+ Déshydroxylation réductrice Spectroscopies Metalloenzyme Enzyme catalysis IspH LytB E. coli [4Fe-4S]2+ Reductive dehydroxylation Spectroscopies 572 Métalloenzymes Catalyse Escherichia coli Spectroscopie Raman Spectroscopie Mössbauer IspH est la dernière enzyme de la voie du méthylérythritol phosphate qui produit les deux précurseurs nécessaires à la biosynthèse de tous les isoprénoïdes. Cette métalloenzyme est essentielle à la survie de nombreux microorganismes dont des bactéries pathogènes et le parasite responsable du paludisme. Etant absente chez l’humain, IspH est une cible de choix pour le développement de nouveaux agents antimicrobiens. En utilisant une approche pluridisciplinaire combinant biologie moléculaire, enzymologie, spectroscopies Raman, Mössbauer et cristallographie, l’objectif de cette thèse était d’étudier le mécanisme d’IspH et plus particulièrement les paramètres qui gouvernent la formation des deux produits dans un ratio défini. Plusieurs mutants d’IspH d’E coli ont été produits, étudiés et caractérisés, et les résultats ont mis en évidence des acides aminés importants pour l’activité enzymatique et aussi pour maintenir le ratio des deux produits. Lors des études biophysiques, ces mutants ont révélé des différences au niveau de leur cofacteur, un centre [4Fe4S]2+, et de leur façon de lier le substrat par rapport à l’enzyme de type sauvage. IspH a pour la première fois été étudiée par spectroscopie Raman et une analyse détaillée a été menée. IspH is the last enzyme of the methylerythritol phosphate pathway which produces the two precursors needed for the biosynthesis of all isoprenoids. This metalloenzyme is essential for the survival of many microorganisms, among them pathogenic bacteria and the parasite responsible for malaria. Being absent in humans, IspH is a suitable target for the development of novel antimicrobial agents. Using a multidisciplinary approach combining molecular biology, enzymology, Raman and Mössbauer spectroscopy, and crystallography, the objective of this thesis was to understand the mechanism of IspH and especially the formation of the two products in a defined ratio. Several mutants were produced, studied and characterized, and the results shed light on some amino acids which are important for the enzyme activity and for maintaining the ratio of the two products. During biophysical studies, these mutants revealed differences in their cofactor, a [4Fe4S]2+ cluster, and in their way to bind the substrate as compared to the wild type enzyme. IspH has for the first time been studied using Raman spectroscopy and a detailed analysis was conducted. Electronic Thesis or Dissertation Text fr PDF 10925228 Université de Strasbourg Strasbourg 2024-12-31 application/pdf 9892489 https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2024/Jobelius_Hannah_2024_ED222.pdf http://www.theses.fr/2024STRAF004/abes Jobelius Hannah 1993-09-19 FR 275013049 0EFB1U07GA4 21926828 4200003 https://theses.fr/2024STRAF004 2024STRAF004 https://doi.org/10.70675/852b7f53zcc34z4a69z98f8z072006777c5a 2024-02-15 Chimie biologique et thérapeutique Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Seemann Myriam MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 148363520 Hellwig Petra MADS_PRESIDENT_DU_JURY 14269746X Ollagnier-De Choudens Sandrine MADS_RAPPORTEUR_1 138476624 Simaan Ariane Jalila MADS_RAPPORTEUR_2 060253673 École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 222 156504081 Institut Terre Environnement (Strasbourg) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 1062624 253262763 ddc:570 Seemann Myriam Hellwig Petra Ollagnier-De Choudens Sandrine Simaan Ariane Jalila École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....) Institut Terre Environnement (Strasbourg) PDF 10925228 confidentialité 2024-02-15 2027-09-01 confidentialité 2024-02-15 2027-09-01 restriction 2024-02-15 2026-03-01 confidentialité 2024-02-15 2027-09-01 confidentialité 2024-02-15 2027-09-01