Note ABES Exploration fonctionnelle de la protéine P3a du turnip yellows virus par des approches moléculaires, microscopiques et génétiques Functional study of the P3a protein of the turnip yellows virus by molecular, microscopic and genetic approaches Polérovirus P3a Turnip yellows virus (TuYV) Co-immunoprécipitation (co-IP) Spectrométrie en tandem (MS/MS) Localisation subcellulaire Microscopie confocale Trafic vésiculaire DRP2B Polerovirus P3a Turnip yellows virus (TuYV) Co-immunoprecipitation (co-IP) Tandem mass spectrometry (MS/MS) Subcellular localization Confocal microscopy Vesicular trafficking DRP2B 579.2 581.3 Phytovirus Protéines virales Génétique végétale Les polérovirus sont des phytovirus responsables de dégâts importants dans diverses cultures agricoles à l’échelle mondiale. Les stratégies de lutte mises en place reposent principalement sur le contrôle de leur transmission par les vecteurs biologiques, qui s’avèrent limitées par la restriction graduelle des intrants chimiques. Dans ce contexte, l’étude approfondie des mécanismes d’action des protéines virales constitue une piste de choix pour initier le développement de nouvelles approches antivirales. Mes travaux de thèse ont porté sur l’exploration fonctionnelle de la protéine P3a du turnip yellows virus (TuYV), responsable du mouvement à longue distance de ce virus restreint au phloème. Grâce à la création d’outils moléculaires (vecteurs d’expression) et biologiques (plantes transgéniques), diverses approches ont été entreprises en prenant comme modèle d’étude principal des versions recombinantes de la protéine P3a. L’interactome cellulaire des protéines P3a recombinantes a été recherché par réalisation de co-immunoprécipitations (co-IP) couplées à la spectrométrie de masse en tandem (MS/MS), chez Nicotiana benthamiana et chez Arabidopsis thaliana. Les données de protéomique ont montré un enrichissement particulièrement important de protéines liées au trafic vésiculaire, à la signalisation intracellulaire, au transport de molécules et à l’homéostasie des chloroplastes. À l’issue de ces analyses, l’interaction de la protéine P3a avec 23 protéines candidates a été testée par plusieurs techniques (FRET-FLIM, BiFC, co-IP et infection de mutants KO), qui ont permis de mettre en valeur, entre autres, l’association avec la protéine DRP2B. Nos résultats ont également montré la présence de la protéine P3a au réticulum endoplasmique et à l’appareil de Golgi, à proximité des complexes de réplication virale. Nous avons également mis en lumière sa capacité à former des multimères mobiles, dont l’assemblage est structure-dépendant et fortement influencé par sa N-terminale. Poleroviruses are plant viruses that account for significant damage to various agricultural crops worldwide. Current control strategies mainly rely on limiting their transmission by biological vectors, but these are increasingly constrained by the gradual restriction of chemical coumpounds. In this context, a detailed study of the mechanisms of action of viral proteins represents a promising outlook for developing new antiviral approaches. My PhD work focused on the functional exploration of the P3a protein of turnip yellows virus (TuYV), which is responsible for the long-distance movement of this phloem-restricted virus. Through the creation of molecular (expression vectors) and biological (transgenic plants) tools, various approaches were undertaken using recombinant versions of the P3a protein as the main study model. The cellular interactome of recombinant P3a proteins was investigated through co-immunoprecipitation (co-IP) coupled with tandem mass spectrometry (MS/MS) in Nicotiana benthamiana and Arabidopsis thaliana. Proteomics data revealed a significant enrichment in proteins related to vesicular trafficking, intracellular signaling, molecule transport and chloroplast homeostasis. Following these analyses, the interaction of the P3a protein with 23 candidate proteins was tested using several techniques (FRET-FLIM, BiFC, co-IP and infection of knock-out mutants), which notably highlighted its association with the DRP2B protein. Our results also showed the presence of the P3a protein in the endoplasmic reticulum and Golgi apparatus, near the viral replication complexes. We also revealed its ability to form mobile multimers, whose assembly is structure-dependent and strongly influenced by its N-terminal region. Electronic Thesis or Dissertation Text fr PDF 1399546897 http://www.theses.fr/2025STRAJ084/document http://www.theses.fr/2025STRAJ084/abes Schalck Lucas 1998-09-01 FR 293358419 1509020173U 21603805 4200047 https://theses.fr/2025STRAJ084 2025STRAJ084 https://doi.org/10.70675/9fd94124ze8f5z45c0zb841z9357ad163a30 2025-11-14 Biologie cellulaire et moléculaire Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Ziegler-Graff Véronique MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 133829766 Duchêne Anne-Marie MADS_PRESIDENT_DU_JURY 131342509 Germain Véronique MADS_RAPPORTEUR_1 202701395 Jacquot Emmanuel MADS_RAPPORTEUR_2 183261879 École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 414 156502844 Institut de biologie moléculaire des plantes (Strasbourg) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 156775727 444 ddc:570 ddc:580 Ziegler-Graff Véronique Duchêne Anne-Marie Germain Véronique Jacquot Emmanuel École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) Institut de biologie moléculaire des plantes (Strasbourg) PDF 1399546897 confidentialité 2025-11-14 2027-11-14 confidentialité 2025-11-14 2027-11-14 confidentialité 2025-11-14 2027-11-14 confidentialité 2025-11-14 2027-11-14