Quand la fourche de réplication rencontre une lésion in vivo : analyse moléculaire et cinétique
Langue Français
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Auteur : Pagès, Vincent
Date de soutenance : 30-11-2003
Directeur(s) de thèse : Fuchs, Robert
Établissement de soutenance : Université Louis Pasteur (Strasbourg)
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
Discipline : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie
Mots-clés libres : ADN
Mots-clés :
- ADN
- Thèses et écrits académiques
- Escherichia coli
- Thèses et écrits académiques
- Cancérogènes
- Thèses et écrits académiques
- Réaction en chaîne de la polymérase
- Thèses et écrits académiques
- ADN polymérases
- Thèses et écrits académiques
Résumé : Le génome des cellules est constamment soumis à des agressions exogènes (rayonnement UV, composés chimiques) ou endogènes (dommages oxydatifs). Ces agressions ont pour conséquence de créer des lésions sur l'ADN. Au cours de la réplication du chromosome, la machinerie réplicative de la bactérie Escherichia coli va rencontrer certaines de ces lésions qui n'ont pas été réparées. Ces lésions constituent un obstacle pour la polymérase réplicative. De nombreuses questions se posent :-Que se passe-t-il au niveau de la lésion et de la polymérase bloquée ?-Que devient la fourche de réplication dont l'un des brins est bloqué ?Afin de répondre à ces questions, nous avons mis au point une technique qui permet d'étudier la cinétique de synthèse de chacun des brins d'un plasmide, portant une lésion ou non, au sein d'une bactérie.Ainsi, nous avons pu déterminer que le temps nécessaire à la réplication au travers d'une lésion modèle que forme le cancérogène Acétylaminofluorène (AAF), est d'environ 50 minutes. Nous montrons également que ce temps de passage dépend du contexte de séquence et de la nature de la lésion. L'analyse des intermédiaires de réplication bloqués au niveau de la lésion a permis de mettre en évidence une inhibition partielle de l'activité de correction de lecture (proofrading) de la polymérase réplicative, dépendante de l'induction du système SOS.L'analyse de la cinétique de réplication des deux brins (endommagé ou non) d'un plasmide a permis de montrer un découplage transitoire de la synthèse des deux brins probablement suivi d'un blocage définitif de la fourche de réplication : ces phénomènes sont nécessaires à la formation de structures dites de "fourches régressées", structures intermédiaires essentielles à la mise en place de mécanismes qui vont assurer la continuité du brin en cours de synthèse, et ainsi restaurer une fourche de réplication intacte.
Entrepôt d'origine : 
Identifiant : ecrin-ori-285141
Type de ressource : Thèse
