Le dosage de vitamines du groupe B (acide pantothénique et cobalamines) dans les aliments après isolement chromatographique et détection fluorimétrique
Langue Français
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Auteur : Pakin, Caroline
Date de soutenance : 01-01-2004

Directeur(s) de thèse : Hasselmann, Claude

Établissement de soutenance : Université Louis Pasteur (Strasbourg)
École doctorale : École doctorale Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....)
 
Discipline : Chimie
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : Vitamine , chromatographie , dérivation , fluorimétrie , biodisponibilité , hydrolyse , aliments , extraction
Mots-clés :
  • Vitamines B - Thèses et écrits académiques
  • Pantothénique, Acide - Thèses et écrits académiques
  • Cyanocobalamine - Thèses et écrits académiques
  • Aliments - Thèses et écrits académiques
  • Chromatographie - Thèses et écrits académiques
  • Fluorimétrie - Thèses et écrits académiques
  • Biodisponibilité - Thèses et écrits académiques
  • Dérivatisation (chimie) - Thèses et écrits académiques
Résumé : La méthode mise au point pour le dosage de l'acide pantothénique libre consiste en une purification des échantillons par passages successifs sur des cartouches échangeuses d'anions et de cations, puis en un isolement chromatographique en phase inverse suivi d'une dérivation post-colonne de l'acide pantothénique en isoindole fluorescent (réaction de la -alanine, obtenue par hydrolyse alcaline à chaud de l'acide pantothénique, avec l'ortho-phthaldialdéhyde en présence d'acide mercaptopropionique). Une hydrolyse enzymatique (pepsine, puis pantéthéinase et phosphatase alcaline), effectuée avant l'étape de purification, permet de libérer l'acide pantothénique lié et ainsi d'obtenir la teneur en vitamine B5 totale dans les aliments.En ce qui concerne la vitamine B12 libre, le protocole proposé comporte une purification très spécifique par passage sur colonne d'immunoaffinité, avec concentration de l'échantillon, puis une transformation de la vitamine en ribazole (hydrolyse alcaline à chaud, puis traitement par une phosphatase alcaline). Le ribazole obtenu est par la suite dosé par fluorimétrie après un isolement chromatographique en phase inverse. Un traitement par la pepsine permet de libérer les différentes formes de la vitamine B12 liées à des protéines et ainsi de pouvoir estimer la teneur en vitamine B12 totale dans les aliments.Ces méthodes, sensibles et répétables, donnent de bons taux de recouvrement. Etant données leur faible limite de détection (0,65 g.g-1 pour la vitamine B5 et 1 ng.g-1 pour la vitamine B12) et la bonne résolution des pics chromatographiques (respectivement d'acide pantothénique et de ribazole), elles devraient pouvoir très vraisemblablement être utilisées pour la détermination de ces vitamines dans n'importe quel échantillon alimentaire.
 
Type de contenu : Text
 
Entrepôt d'origine : Ressource locale
Identifiant : ecrin-ori-285971
Type de ressource : Thèse