Mesure cellule par cellule du nombre de copies de plasmide chez Escherichia coli
Langue Français
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Auteur : Rick, Christian
Date de soutenance : 01-01-2005
Directeur(s) de thèse : Chatenay, Didier
Établissement de soutenance : Université Louis Pasteur (Strasbourg)
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
Discipline : Biophysique et biologie structurale
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie
Mots-clés libres : Escherichia coli , plasmide , microscopie de fluorescence
Mots-clés :
- Escherichia coli
- Thèses et écrits académiques
- Plasmides
- Thèses et écrits académiques
- Cytométrie de flux
- Thèses et écrits académiques
Résumé : Toute l'information génétique nécessaire à la vie de la bactérie Escherichia coli est portée par son unique chromosome : une molécule d'ADN circulaire de 4,6 millions de paires de bases. En plus de son ADN chromosomique, une bactérie peut contenir des molécules d'ADN supplémentaires appelées plasmides. L'objet de cette thèse est la mise au point d'une expérience de mesure cellule par cellule du nombre de plasmides. Il s'agit de prendre, une par une, plusieurs milliers de bactéries et ensuite de compter le nombre de plasmides qu'elles contiennent.Pour cela nous avons utilisé des techniques de micro lithographie pour construire un dispositif constitué de réservoirs de 5 mm de diamètre reliés entre eux par un canal de 5 m de large. Une goutte de liquide contenant les bactéries est déposée dans l'un des réservoirs. Une différence de hauteur de liquide et/ou une tension électrique appliquée entre les réservoirs permet de faire passer les bactéries d'un réservoir à l'autre, une par une, devant l'objectif d'un microscope inversé.Le nombre de plasmides dans la bactérie est mesuré de façon indirecte. Nous avons construit des plasmides qui portent tous un gène codant une protéine fluorescente verte, et lorsqu'une bactérie passe devant l'objectif du microscope nous mesurons la fluorescence de la cellule. Notre expérience repose sur l'hypothèse que le niveau d'expression est le même pour chaque copie du gène : la fluorescence de la cellule est alors proportionnelle au nombre de copies du plasmide.Cette thèse décrit l'expérience de microscopie de fluorescence ainsi que la construction des souches bactériennes. Les résultats préliminaires que nous avons obtenus montrent que le dispositif expérimental est au point : Lors d'une expérience, nous mesurons la fluorescence de plusieurs milliers de bactéries. Le signal est largement au dessus du bruit et les résultats sont reproductibles.
Entrepôt d'origine : 
Identifiant : ecrin-ori-288093
Type de ressource : Thèse
