Caractérisation thermodynamique et structurale des complexes ADN-peptide-membrane
Langue Anglais
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Auteur : Fix, Lydia
Date de soutenance : 01-01-2005
Directeur(s) de thèse : Bechinger, Burkhard
Établissement de soutenance : Université Louis Pasteur (Strasbourg)
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
Discipline : Sciences de la vie et de la santé
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie
Mots-clés libres : Peptides
Mots-clés :
- Peptides
- Thèses et écrits académiques
- Protéines
- Thèses et écrits académiques
- Interactions ADN-protéine
- Thèses et écrits académiques
- Spectroscopie
- Thèses et écrits académiques
- Calorimétrie
- Thèses et écrits académiques
Résumé : Les peptides constituent un moyen simplifié d'étudier le fonctionnement des protéines et des moyens thérapeutiques potentiellement très intéressants. Ce travail a permis l'investigation de deux peptides, le peptide synthétique LAH4 et le domaine T de la protéine diphtérique en interaction avec d'autres macromolécules.Le peptide LAH4 conçu et synthétisé par notre laboratoire, présente les propriétés générales des peptides amphipathiques et se lie également fortement à l'ADN permetant son transfert dans les cellules en tant que vecteur de transfection. Dans le but de mieux comprendre l'activité du peptide LAH4 pendant la transfection, j ai examiné ses propriétés biophysiques par ITC (isothermal titration calorimetry), CD (Circular Dichroism) et RMN du solide. Les resultats montrent que la structure en hélice- du peptide est maintenue après complexation de l'ADN. A pH neutre des liaisons électrostatiques lient les molécules de façon non spécifique et un ratio très élevé de LAH4 est requis pour la saturation et la condensation de l'ADN. A plus faible pH des interactions électrostatiques et des contributions hydrophobes stabilisent le complexe peptide/ADN, et le ratio de saturation est réduit de presque moitié. Les données concordent à l'élaboration d'un model d'action du peptide LAH4 pendant les premières étapes de la transfection. En parallèle, nous avons developé une strategie d'expression du LAH4 chez E.coli afin de le marquer 13C uniformément pour son étude par RMN.Des études par RMN du solide ont été entreprises sur le domaine T de la toxine diphtérique afin de comprendre la topologie dans des vésicules membranaires. Des échantillons de domaine T uniformément marqués en 15N ont été préparés en reconstituant les conditions présentes dans l'endosome de façon très simplifiée. Les résultats montrent un rôle important joué autant par le lipide anionique POPG que par le pH dans l'insertion du peptide dans la membrane et dans l'interruption de celle-ci.
Entrepôt d'origine : 
Identifiant : ecrin-ori-289617
Type de ressource : Thèse
