Mise au point de dispositifs microfluidiques pour la cristallisation et l'analyse cristallographique des biomolécules
Langue Français
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Auteur : Dhouib, Kaouthar
Date de soutenance : 14-10-2009

Directeur(s) de thèse : Giegé, Richard - Sauter, Claude


Établissement de soutenance : Université de Strasbourg
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
 
Discipline : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Classification : Chimie, minéralogie, cristallographie, Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : cristallogenèse , cristallographie , microfluidique , contre-diffusion , biomolécules , protéine , acide-nucléique , virus
Mots-clés :
  • Cristallisation - Thèses et écrits académiques
  • Microfluidique - Thèses et écrits académiques
  • Circuits intégrés - Thèses et écrits académiques
  • Biomolécules - Thèses et écrits académiques
Résumé : Plusieurs études ont montré qu'un environnement dépourvu de convection améliore la croissance et la qualité des cristaux macromoléculaires. Les systèmes microfluidiques présentent des propriétés similaires du fait des dimensions réduites des canaux microfluidiques. Ce projet a permis la conception de puces microfluidiques de cristallisation et d'analyse in situ des cristaux de biomolécules facile à utiliser. Ce dispositif microfluidique met à profit la méthode de contre-diffusion, très efficace pour le criblage et l'optimisation de conditions. Différents aspects pratiques sont abordés dans cette thèse parmi lesquels, le choix de la géométrie, le choix des matériaux, le choix des méthodes de fabrication, les techniques de remplissage, le fonctionnement des systèmes, les développements en vue d'une approche de cristallisation et d'analyse crisallographique à haut débit. Plusieurs génération de puce ont ainsi vu le jour, plusieurs macromolécules biologiques de natures diverses, ayant des propriétés différentes et de plusieurs tailles ont été cristallisées dans nos systèmes microfluidiques. L'analyse des cristaux par diffraction aux rayons X a permis de collecter des données même à haute résolution et de calculer les cartes de densité électonique à partir des données enregistrés. La dernière génération de puce a été conçue sur un format standard compatible avec l'utilisation de robots de pipetage pour la préparation des expériences et d'automates passeurs d'échantillons pour l'analyse aux rayons X sur source synchrotron.
 
Type de contenu : Text
 
Entrepôt d'origine : Ressource locale
Identifiant : ecrin-ori-298689
Type de ressource : Thèse