Selection of streptomyces griseus aminopeptidases by droplet microfluidics
Langue Anglais
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Auteur : Ditmarsch, Dave van
Date de soutenance : 18-12-2009
Directeur(s) de thèse : Griffiths, Andrew
Établissement de soutenance : Université de Strasbourg
École doctorale : École doctorale Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....)
Discipline : Chimie
Classification : Chimie, minéralogie, cristallographie, Génie chimique, technologies alimentaires
Mots-clés libres : Aminopeptidases
Mots-clés :
- Aminopeptidases
- Thèses et écrits académiques
- Streptomyces griseoviridis
- Thèses et écrits académiques
- Microfluidique
- Thèses et écrits académiques
Résumé : L'aminopeptidase de streptomyces griseus (SGAP; numéro de l'enzyme commission 3.4.11.10) peut catalyser plusieurs réactions: elle est (i) une aminopeptidase non-spécifique, (ii) une diesterase de phosphate et (iii) une oxidase de catéchol. supposée d'être un intermédiaire évolutif, elle peut être utilisée pour caractériser des voies d'évolution. le tri activé par la fluorescence des gouttelettes (FADS) pourrait être utilisé comme outil pour faire de l'évolution dirigée de la SGAP. Ce projet décrit le développement d'un système d'expression bactérien pour la SGAP, d'un test fluorogénique pour l'activité peptidase de la SGAP ainsi que son utilisation dans une sélection microfluidique. le facteur d'enrichissement expérimental (28.9) est proche du maximum théorique (110.5). Ensuite, la sgap a été fusionnée avec mcherry---une protéine fluorescente dans les longueurs d'onde rouge---afin de normaliser pour le niveau d'expression de la SGAP. une correlation de R2 = 1.00 a été trouvée entre l'activité de la SGAP et la fluorescence de mcherry. mais il n était pas possible de détecter la mcherry en microfluidique dû au montage optique. Pour caractériser des voies d'évolution, il faut pouvoir trier pour deux activités simultanément. à cet effet l'acide 7-aminocoumarine-4-méthanesulfonique a été synthétisée comme composante des nouveaux substrats fluorogéniques. Enfin, comme projet parallèle, de la transcription et traduction in vitro de lacz dans des émulsions 2d a démontré que le mélange de l'huile et du tensioactif utilisé était biocompatible. en plus, il était possible de détecter la lacz à une telle faible concentration, que les analyses (méta-)génomiques sont envisageables.
Entrepôt d'origine : 
Identifiant : ecrin-ori-299239
Type de ressource : Thèse
