Production du peptide P-LAH4 chez E. coli et études par RMN de ses propriétés antibactérienne et de transfection d'ADN
Langue Français
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Auteur : Vidovic, Verica
Date de soutenance : 08-07-2011

Directeur(s) de thèse : Bechinger, Burkhard

Établissement de soutenance : Université de Strasbourg
École doctorale : École doctorale Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....)
 
Discipline : Chimie
Classification : Chimie, minéralogie, cristallographie, Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : peptide antibactérien , expression chez E. coli , résonnance magnétique nucléaire , vecteur transfectant d'ADN , REDOR , structure et topologie , interactions macromoléculaires
Mots-clés :
  • Peptides - Thèses et écrits académiques
  • Relations structure-activité - Thèses et écrits académiques
  • Antibactériens - Thèses et écrits académiques
  • Transformation génétique - Thèses et écrits académiques
  • Escherichia coli - Thèses et écrits académiques
  • Antibiotiques peptidiques - Thèses et écrits académiques
  • Membranes (biologie) - Thèses et écrits académiques
  • Résonance magnétique nucléaire - Thèses et écrits académiques
Résumé : LAH4 est un peptide antibactérien de 26 acides aminés capable de se complexer à l'ADN et de permettre son transfert dans les cellules eucaryotes. Nous avons développé une stratégie d'expression chez E. coli qui permet la production de 10mg de peptide P-LAH4 purifiés et marqués en 15N par litre de culture. Malgré l'addition d'une proline, le peptide P-LAH4 conserve son caractère antibactérien et transfectant d'ADN. La structure, la topologie du peptide associé aux membranes, ainsi que ses interactions avec l'ADN ont été étudiées par RMN. L'étude de sa structure dans des micelles de DPC à pH=5,5 a permis l'attribution des résonances des noyaux NH, HN, Ca, Cb et Ha pour 90 % des résidus. Le peptide adopte une conformation en hélice a des résidus A4 à A23. Les études par RMN 15N du peptide reconstitué dans les bicouches orientées de POPC à pH=5,5 et 6,9, indique qu il est orienté parallèlement à la membrane à pH=5,5 et incliné d'environ 10° par rapport à la normale à la bicouche à pH=6,9. De plus, il adopte également une structure en hélice a dans les bicouches aux deux pH. La technique REDOR appliquée sur les complexes P-LAH4/ADN à pH=5 montre que les résidus lysines sont proches des noyaux 31P de l'ADN, contrairement aux résidus histidines, ce qui suggère un modèle d'interaction dans lequel le peptide agirait avec l'ADN par l'intermédiaire d'interactions électrostatiques via ces extrémités. Le marquage sélectif en 13C/15N sur chacune des quatre lysines séparément révèle que les lysines 2 et 25 sont les résidus moteurs dans l'interaction avec l'ADN.
 
Type de contenu : Text
 
Entrepôt d'origine : Ressource locale
Identifiant : ecrin-ori-306887
Type de ressource : Thèse