Caractérisation d'un sous-complexe de TFIID et de la fonction anti-oncogène de sa sous-unité TAF4 dans les fibroblastes embryonnaires murins
Langue Français
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Auteur : Cler, Émilie
Date de soutenance : 18-09-2009
Directeur(s) de thèse : Davidson, Irwin
Établissement de soutenance : Université de Strasbourg
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
Discipline : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie
Mots-clés libres : ARN , TFIID , fibroblaste , TAF4
Mots-clés :
- Transcription génétique
- Thèses et écrits académiques
- Facteurs de transcription
- Thèses et écrits académiques
- Régulation génétique
- Thèses et écrits académiques
- Histones
- Thèses et écrits académiques
- Fibroblastes
- Thèses et écrits académiques
- Murins
- Thèses et écrits académiques
Résumé : L'initiation de la transcription par l'ARN polymérase II nécessite la formation d'un complexe de pré-initiation autour du site de démarrage de la transcription. Parmi les facteurs présents dans ce complexe, se trouve le complexe multi-protéique TFIID de 1,2 MDa, composé de TBP (TATA binding protein) et de 14 TAFs (TBP-associated factors). Au cours de ma thèse, j ai travaillé sur TAF4, une protéine de 135 kDa qui présente un intérêt particulier du fait de son rôle présumé dans la signalisation par l'AMPc, les récepteurs nucléaires (notamment RAR), et les stress kinases. L'étude du facteur de transcription TAF4 a d'abord été envisagée, au préalable, d'un point de vue transcriptionnel. Elle s'est enrichie d'une composante en cancérologie, dès lors que l'étude approfondie des fibroblastes embryonnaires murins (MEFs) Taf4-/- a révélé l'importance de la protéine TAF4 en tant qu anti-oncogène. Ainsi, ma thèse comporte deux parties distinctes n ayant en commun que l'importance du facteur de transcription TAF4. Afin de purifier des complexes contenant TAF4, j ai généré des lignées de MEFs exprimant un dérivé de TAF4 porteur d'une étiquette Flag. Des immunoprécipitations anti-Flag ainsi que des expériences de gel filtration et de centrifugation sur gradient de glycérol ont permis de détecter l'existence d'un sous-complexe de TFIID formé par TAF4, TAF5, TAF6, TAF9 et TAF12. Ce complexe est plus abondant que le TFIID complet dans les MEFs. En revanche, dans d'autres lignées cellulaires qui expriment des niveaux élevés de TBP, la majorité de TAF4 se trouve associée à TFIID. Nous avons donc mis en évidence l'existence d'un complexe intermédiaire d'assemblage de TFIID et montré que son abondance varie selon le type cellulaire en fonction du niveau d'expression de TBP. L'inactivation de TAF4 dans les MEFs provoque une croissance autocrine, un changement de morphologie, mais également une perte de l'inhibition de contact et une croissance cellulaire en multicouches. En injectant les MEFs Taf4-/- dans des souris nues, j ai mis en évidence leur développent rapide et leur transformation en sarcomes non différenciés, localement invasifs dans la couche musculaire sous-jacente. Le traitement des MEFs (avant injection) par l'acide rétinoïque tout-trans (AR) supprime la formation de tumeurs induites par ces cellules, mais n affecte pas leur prolifération in vitro. Nos résultats suggèrent un nouveau mécanisme de suppression de tumeur par l'AR qui modifie les propriétés de motilité et d'adhérence de ces MEFs par la régulation de plusieurs gènes impliqués dans le remodelage de la matrice extracellulaire. A partir de l'ensemble de ces résultats, nous suggérons que l'AR exerce son effet anti-tumoral non pas au niveau de la régulation de la prolifération ou de l'apoptose, mais en agissant sur des gènes qui modifient le microenvironnement tumoral.
Entrepôt d'origine : 
Identifiant : ecrin-ori-306907
Type de ressource : Thèse
