Contribution à la détermination de la structure de la sous-unité RPB11 de l'ARN polymérase II humaine
Langue Français
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Auteur : Naderi, Kambiz
Date de soutenance : 23-09-2011

Directeur(s) de thèse : Vigneron, Marc

Établissement de soutenance : Université de Strasbourg
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
 
Discipline : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : ARN polymérase II , transcription , RPB11 , RPB3 , motif alpha , cristallisation , plasmodium falciparum , complémentation fonctionnelle
Mots-clés :
  • ARN polymérases - Thèses et écrits académiques
  • Transcription génétique - Thèses et écrits académiques
  • Plasmodium falciparum - Thèses et écrits académiques
Résumé : L'ARN polymérase II (ARNP II) transcrit la quasi-totalité du génome nucléaire eucaryotique. L'ARNP II est un complexe constitué de 12 sous-unités. Une étape importante de son assemblage est la formation d'un hétérodimère entre les sous-unités RPB3 et RPB11. Nous avons examiné les interactions par double hybride entre les sous-unités RPB3 et RPB11, soit humaines, soit de levure, ainsi que l'effet de diverses mutations sur les interactions observées. Nous avons démontré que la protéine RPB11 humaine codée par le gène POLR2J1 forme un dimère stable, au contraire de son homologue de levure qui en est incapable. Nous avons constaté que les interactions observées ne sont pas sensibles aux mêmes mutations en particulier celles qui affectent un motif spécialement conservé nommé motif alpha que l'on retrouve jusque dans la sous-unité alpha de l'ARNP eubactérienne. Nous avons réussi à cristalliser cette protéine afin de contribuer à la détermination de la structure tridimensionnelle de l'ARNP II humaine. Nous avons caractérisé génétiquement l'ARNP II de Plasmodium falciparum en réalisant des tests de complémentation fonctionnelle des sous-unités de ce complexe enzymatique. Nos résultats indiquent que les sous-unités PfRPB4-5-7-9 et 12 codent des protéines capables de remplacer leurs homologues chez la levure Saccharomyces cerevisiae. De fait, nous avons construit des lignées de levures exprimant de façon stable des protéines de P. falciparum. Par ailleurs, les sous-unités PfRPB3-6-8-10 et 11 ne complémentent pas. Nous avons aussi construit des souches viables de levures dont le site de fixation de l'alpha-amanitine sur leur ARNP II est plasmodifié ou humanisé .
 
Type de contenu : Text
 
Entrepôt d'origine : Ressource locale
Identifiant : ecrin-ori-307047
Type de ressource : Thèse