Une E.S.T. (Expressed Sequence Tag) conduit à la caractérisation, chez le houblon (Humulus lupulus), de trois inhibiteurs de xyloglucanase dont l'expression est influencée par des facteurs biotiques et abiotiques Characterization of three XEGIPs (xyloglucan-specific endoglucanase inhibitor proteins) from Humulus lupulus,inhibiting property against endoxylanases (glycosyl hydrolase family 12) and expression eliciting during physiological developpement and (a)biotic XEGIP inhibiteur de xyloglucanase houblon endoglucanase défense de la plante Fusarium graminearum Pas de mots clés en anglais 572.7 583 571.2 Houblon Thèses et écrits académiques Biomolécules végétales Thèses et écrits académiques Plantes Thèses et écrits académiques Enzymes fongiques Thèses et écrits académiques Fusarium Thèses et écrits académiques Les pathogènes fongiques sécrètent un arsenal enzymatique pour dégrader la paroi végétale des plantes hôtes. Certaines de ces enzymes peuvent être inhibées par des protéines de plante. Une famille d'inhibiteurs, ayant la capacité d'agir sur les xyloglucanases et nommée XEGIP (xyloglucan-speci c endoglucanase inhibitor protein) est peu caractérisée et ce projet a permis la mise en évidence et l'étude de trois de ces protéines chez le houblon (Humulus lupulus). Des nombreuses preuves ont pu être accumulées sur le rôle potentiel de ces protéines dans la défense de la plante. À partir d'une EST (Expressed Sequence Tag ), trois gènes (67 % d'identité nucléotidique), codants des XEGIPs ont été identi és, clonés puis exprimés en cellules d'insectes. Des mesures d'activité enzymatique avec le substrat xyloglucane ont pu con rmer la fonction de ces protéines : en contact avec les protéines recombinantes, l'activité xyloglucanase des surnageants de culture d'Aspergillus aculeatus et de Fusarium graminearum a pu être inhibée pour l'inhibiteur n°1 et l'inhibiteur n°2 et non pour l'inhibiteur n°3. La recherche d'enzymes cibles a conduit à la production, l'expression et la caractérisation de quatre protéines de GH12 de F. graminearum jusqu alors non étudiées. Les analyses en PCR quantitative ont montré une distribution spatiale différente des inhibiteurs ainsi que l'existence d'une expression différentielle selon les variétés. Une tendance générale de l'expression de l'inhibiteur n°1 et l'inhibiteur n°2 a montré une induction préférentielle respectivement lors de stress abiotiques ou biotiques. L'inhibiteur n°3 présente une surexpression importante lors de la germination au stade cotylédons ou dans les eurs femelles en comparaison à celle de la graine. Phytopathogenic fungi secrete a powerful arsenal of enzymes potentially active on each polysaccharide layer of the plant cell. As a rst line of defense, plant cell walls contain several inhibitors to speci cally inhibit the activity of these microbial enzymes. In the present study we describe the identi cation and characterization of three xyloglucan-speci c endoglucanase inhibitor proteins (XEGIPs) from hop (Humulus lupulus). Some evidences have been accumulated about the role of these XEGIPs in plant defense. Starting from an expressed sequence tag three genes were isolated by the rapid ampli cation of cDNA ends, cloned and corresponding proteins expressed in insect cells. The functions of the proteins were validated by enzymatic activity measurements were performed with xyloglucan as substrate. Inhibitor n°1 and inhibitor n°2 were shown to inhibit the hydrolytic activity of xyloglucan-speci c endoglucanase from the fungi Aspergillus aculeatus and Fusarium graminearum. The investigation on target enzymes lead to production, expression and characterization of four unknown GH12 from F. graminearum. Real-time PCR have shown variations in the spatial distribution of inhibitors and differential expression between hop cultivars. The main lines are the following : inhibitor n°1 is expressed as a result of wounding and inhibitor n°2 is inducible by F. graminearum. Inhibitor n°3 could be have a physiological function with a positive regulation during the germination stages and in the female hop cones. Electronic Thesis or Dissertation Text fr France PDF https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2011/HABRYLO_Olivier_2011.pdf Université de Strasbourg Strasbourg Habrylo Olivier 1984-01-01T00:00:00 FR 153623659 http://www.theses.fr/2011STRA6143 2011STRA6143 2011-08-26T00:00:00 Sciences de la vie et de la santé Université de Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Phalip Vincent 161746829 École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) ED414 156502844 ddc:570 ddc:580