Approche structurale du rôle de l'ARN 7SK comme régulateur de la transcription eucaryote
Langue Anglais
Accéder à la thèseDroits d'accès : non autorisé

Ce document est protégé en vertu du Code de la Propriété Intellectuelle.

 
Auteur : Martinez Zapien, Denise
Date de soutenance : 22-09-2011

Directeur(s) de thèse : Dock-Brégeon, Anne-Catherine

Établissement de soutenance : Université de Strasbourg
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
 
Discipline : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : transcription , ARN non codé , 7SK snRNA , HEXIM1 , P-TEFb , interaction protéine-ARN , structure , EMSA
Mots-clés :
  • Cellules eucaryotes - Thèses et écrits académiques
  • Transcription génétique - Thèses et écrits académiques
  • Interactions ARN-protéine - Thèses et écrits académiques
Résumé : 7SK est un ARN non-codant présent dans le noyau des métazoaires. Avec la protéine HEXIM1, 7SK séquestre et inhibe l'activité kinase du facteur d'élongation de transcription, P-TEFb. P-TEFb stimule l'élongation productive de l'ARN polymérase II. L'association de 7SK à différents partenaires protéiques peut jouer un rôle clé dans la régulation de la transcription. Nous avons identifié et caractérisé les déterminants structurels de 7SK pour son interaction avec ses partenaires protéiques, et en particulier avec HEXIM1. Des études SHAPE et SAXS ont suggéré que 7SK est une molécule semi-compact, flexible et modulaire. Trois sous-domaines structurels autonomes ont été identifiés. L'un d'eux, HP1 (nucléotides 24 à 87), interagit avec HEXIM1. Une cartographie par RMN a montré que l'ARM de HEXIM1 est capable de lier spécifiquement le motif GAUC conservé dans la région apicale de HP1. Les Us extrudées qui bordent ce motif ont un rôle essentiel dans la reconnaissance. Lors de la liaison, la tige comprenant le motif GAUC s'ouvre et la paire de base A39/G68 est formée. Nous avons constaté par des expériences EMSAs que des mutations du motif GAUC, des Us extrudées ou de la boucle interne dans la région centrale de HP1, nuisent à la liaison à HEXIM1, alors que les mutations dans la région basale de la tige n'affectent pas l'interaction. Des expériences MS ont montré que HEXIM1 lie HP1 sous forme de dimère. En utilisant une HEXIM monomère, nous avons constaté que deux monomères interagissent avec HP1. Ces résultats confirment l'existence d'un deuxième site de liaison de HP1, dont l'emplacement précis reste encore à déterminer.
 
Type de contenu : Text
 
Entrepôt d'origine : Ressource locale
Identifiant : ecrin-ori-308947
Type de ressource : Thèse