Nouvelles méthodologies de la RMN de l'état solide et études biophysiques sur des peptides antimicrobiens et de synthèse dans des membranes modèles et naturelles
Langue Anglais
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Auteur : Perrone, Barbara
Date de soutenance : 30-09-2011

Directeur(s) de thèse : Bechinger, Burkhard


Établissement de soutenance : Université de Strasbourg
École doctorale : École doctorale Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....)
 
Discipline : Biophysique et biologie structurale
Classification : Physique

Mots-clés libres : NMR , RODEO , antimicrobial peptides , membrane , Escherichia coli , citrate , LAH4 , KALP
Mots-clés :
  • Peptides - Thèses et écrits académiques
  • Membranes (biologie) - Thèses et écrits académiques
  • Spectroscopie - Thèses et écrits académiques
  • Résonance magnétique nucléaire - Thèses et écrits académiques
Résumé : La spectroscopie de Résonance Magnétique Nucléaire des solides est un outil puissant pour l'étude structurale des peptides membranaires. L'angle d'inclinaison par rapport à la membrane de peptides structurés en hélice peut être obtenu par l'analyse des spectres de poudre provenant de systèmes non-orientés par rapport au champ magnétique statique. Cette approche permet un meilleur contrôle sur plusieurs paramètres par rapport aux systèmes orientés. Cependant, les spectres de poudre de ces systèmes présentent d'importantes distorsions à proximité du déplacement chimique isotrope (Magic Angle Hole, MAH) qui empêchent d'atteindre une qualité satisfaisante des paramètres RMN mesurés. Dans ce travail de thèse nous avons développé une nouvelle méthode qui récupère la forme théorique des spectres de poudre : l'expérience RODEO (ROtor-Directed Exchange of Orientations). La méthode a été appliquée avec succès à des peptides insérés dans des membranes models. Enfin nous avons appliquée l'expérience RODEO à un mélange de lipides extraits de membranes naturelles, et, pour la première fois, in vivo, dans des bactéries Escherichia coli. Dans la deuxième partie de ce travail, nous rapportons des résultats inattendus sur le mécanisme d'insertion du peptide antimicrobien LAH4. Il a été précédemment montré que l'hélice LAH4 est orientée parallèlement à la surface de la membrane dans des conditions acides, tandis que, à pH neutre, le peptide adopte une orientation trans-membranaire. En revanche, nous avons constaté que lorsque le tampon citrate est ajouté pour réguler le pH à 5, le peptide s'insère de manière transmembranaire. Quelques explications possibles sont proposées.
 
Type de contenu : Text
 
Entrepôt d'origine : Ressource locale
Identifiant : ecrin-ori-308987
Type de ressource : Thèse