Fluorophores ratiométriques pour le marquage de peptides et d'oligonucléotides‎ : applications à la protéine de la nucléocapside de VIH-1‎
Langue Anglais
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Auteur : Postupalenko, Viktoriia
Date de soutenance : 26-09-2011

Directeur(s) de thèse : Mely, Yves - Pivovarenko, Vasyl

Établissement de soutenance : UNISTRA - Université de Strasbourg
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
 
Discipline : DISC-16
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : Flurorescence, sondes fluorescentes, interactions peptide-membrane, nucléocapside
Mots-clés :
  • Sondes fluorescentes - Thèses et écrits académiques
  • VIH (virus) - Thèses et écrits académiques
  • Sondes à acide nucléique - Thèses et écrits académiques
Résumé : Ce travail porte sur le développement de sondes fluorescentes 3-hydroxychromones pour suivre l’interaction de protéines avec des oligonucléotides (ODNs) et des membranes. Ces sondes ont deux bandes d'émission bien séparées et sensibles à l'environnement, résultant d’un transfert de proton intramoléculaire à l’état excité, d’où une détection des interactions via leur rapport d'intensité. Un analogue d’acide aminé dérivé de la sonde 3HC a été synthétisé puis inséré à des positions ciblées de la protéine de la nucléocapside (NC) du VIH-1. Nous avons ainsi obtenus des informations site-spécifique sur les modifications induites à proximité du site marqué lors de l’interaction avec des ODNs, une alternative étant d’utiliser des nucléosides fluorescents introduits en différentes positions des ODNs. Pour étudier les interactions peptide-membrane, une sonde 3HC sensible aux changements de polarité en solvants apolaires a été couplée à l’extrémité N-terminale de peptides synthétiques (mélittine, magaïnine, poly-L-lysine) connus pour interagir avec les biomembranes. Le rapport d'intensité se corréle bien avec la profondeur d'insertion de cette région N-terminale. Enfin, nous avons appliqué cette sonde pour détecter des interactions possibles de la NC avec les membranes. Nous avons montré que NC se lie avec une forte affinité par voie électrostatique aux membranes contenant des lipides anioniques, permettant de localiser NC au niveau des têtes lipidiques. NC déstabilise la membrane de manière dose-dépendante. Les complexes NC-ADN se lient également aux membranes comme la NC libre, permettant de suggérer une participation de NC à l'import nucléaire du complexe de pré-intégration.
 
Type de contenu : Text
Format : PDF
 
Entrepôt d'origine : Ressource locale
Identifiant : ecrin-ori-47608
Type de ressource : Thèse