Inhibition et régulation des voies de biosynthèse des isoprénoïdes chez les végétaux
Langue Anglais
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Auteur : Hartmann, Michael
Date de soutenance : 14-09-2010

Directeur(s) de thèse : Bach, Thomas J.

Établissement de soutenance : UNISTRA - Université de Strasbourg
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
 
Discipline : DISC-16
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : Iisoprenoides, voie du MEP, herbicides
Mots-clés :
  • Isoprénoi͏̈des - Thèses et écrits académiques
  • Biosynthèse - Thèses et écrits académiques
  • Nicotiana tabaccum - Thèses et écrits académiques
  • Antiparasitaires - Thèses et écrits académiques
  • Herbicides - Thèses et écrits académiques
Résumé : Dans notre laboratoire, nous avons récemment mis au point un système permettant de visualiser la prénylation des protéines in vivo, en utilisant une lignée cellulaire de tabac BY-2 transformée exprimant une protéine GFP inductible par la déxaméthasone et fusionnée en C-terminal avec le domaine basique d’une calmoduline de riz, portant un motif de géranylgéranylation (GFP-BD-CVIL) (Gerber et al., 2009). L'inhibition de la voie du MEP et de la géranylgéranyl-transférase de type 1 (PGGT-1) par des inhibiteurs spécifiques se traduit par une délocalisation de la protéine GFP-BD-CVIL de la membrane plasmique au noyau. Par contre, l'inhibition de la voie du MVA n'affecte pas la localisation de la protéine. Des essais de complémentation chimique avec des intermédiaires biosynthétiques ont confirmé que les précurseurs du GGPP, pour l'isoprénylation de la protéine de fusion, sont fournis essentiellement par la voie du MEP.Afin d'optimiser ce système de visualisation, la lignée cellulaire exprimant la protéine GFP-BD-CVIL a été retransformée avec un vecteur inductible par l'estradiol, contrôlant l'expression d'une protéine mRFP qui marque le noyau des cellules. Cette nouvelle stratégie simplifie la quantification de cellules viables. Couplée à un système semi-automatique de comptage, elle réduit à la fois le temps d'analyse et le risque de biais générés par l'utilisateur. Finalement, le test a été adapté pour l'utilisation de plaques de verre à 96 puits, permettant le criblage d'inhibiteurs spécifiques de la voie du MEP, susceptibles d'avoir des applications en pharmacie et en agriculture, tels que des antibiotiques, des agents anti-paludisme ou des herbicides.
 
Type de contenu : Text
Format : PDF
 
Entrepôt d'origine : Ressource locale
Identifiant : ecrin-ori-47638
Type de ressource : Thèse