Synthèse et évaluation d'oligonucléotides conjugués à des polyamines
Langue Français
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Auteur : Perche, Phanélie
Date de soutenance : 26-10-2010

Directeur(s) de thèse : Kotera, Mitsuharu

Établissement de soutenance : UNISTRA - Université de Strasbourg
École doctorale : École doctorale Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....)
 
Discipline : DISC-20
Classification : Chimie, minéralogie, cristallographie

Mots-clés libres : Oligonucléotides conjugués, spermine, guanidine, internalisation cellulaire, correction de l'épissage alternatif, siRNAs, résistance au sérum
Mots-clés :
  • Thérapie génique - Thèses et écrits académiques
  • Oligonucléotides - Thèses et écrits académiques
  • Guanidine - Thèses et écrits académiques
  • Polyamines - Thèses et écrits académiques
  • Transfection - Thèses et écrits académiques
  • Épissage (génétique - Thèses et écrits académiques
  • Cytologie - Thèses et écrits académiques
  • Molécules antisens - Thèses et écrits académiques
  • Sérum-albumine - Thèses et écrits académiques
Résumé : Ce travail porte sur la synthèse et l’évaluation d’oligonucléotides conjugués à des polyamines. Dans un premier temps, une polyamine naturelle, la spermine a été couplée répétitivement à l’extrémité 3’ d’un oligonucléotide grâce à une nouvelle stratégie de conjugaison : la formation d’une liaison guanidine inter spermines. Jusqu’à 3 résidus polyaminés ont ainsi été ajoutés à un décamère. Ces conjugués présentent une affinité améliorée pour des oligonucléotides de séquences complémentaires. Toutefois, leur synthèse demande à être perfectionnée pour obtenir des composés de charge globale cationique. Dans un deuxième temps, des oligonucléotides antisens présentant un squelette modifié 2’ OMe phosphorothioate ont été couplés en 5’ à des spermines par la chimie des phosphoramidites. Ces oligonucléotides, cationiques, ont montré une internalisation cellulaire sans agent de transfection et une efficacité biologique sur un modèle in vitro de correction de l’épissage alternatif. Enfin, des siRNAs cationiques ont été synthétisés et conjugués à des résidus lipidiques. Ces parties lipophiles servent « d’ancres » pour pré associer les siRNAs avec une protéine sérique, l’albumine, afin de les protéger in vivo de la dégradation par les nucléases. Leur capacité à se présenter sous forme de molécules isolées ou à s’auto assembler, et leur interaction avec l’albumine ont été caractérisées par microscopie électronique en transmission. Ces siRNAs sont capables d’éteindre l’expression d’un gène (ca 90%) in vitro sans agent de transfection, y compris en présence de sérum. Leur pré association avec l’albumine n’affecte en rien leur efficacité.
 
Type de contenu : Text
Format : PDF
 
Entrepôt d'origine : Ressource locale
Identifiant : ecrin-ori-47678
Type de ressource : Thèse