Développement du couplage électrophorèse capillaire - spectrométrie de masse haute sensibilité : application à la caractérisation fine de protéines
Langue Français, Anglais
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Auteur : Gahoual, Rabah
Date de soutenance : 29-09-2014

Directeur(s) de thèse : Leize-Wagner, Emmanuelle

Président : Hellwig, Petra
Rapporteur(s) : Bolbach, Gérard - Wuhrer, Manfred
Membre(s) du jury : François, Yannis - Beck, Alain

Établissement de soutenance : Strasbourg
Laboratoire : Chimie de la matière complexe (Strasbourg)
École doctorale : École doctorale des Sciences chimiques (Strasbourg ; 1995-....)
 
Discipline : Chimie analytique
Classification : Chimie, minéralogie, cristallographie

Mots-clés libres : Chimie analytique, Spectrométrie de masse, Electrophorèse capillaire, Anticorps monoclonaux, Glycosylations, Modifications post-traductionnelles, Complexes non-covalents
Mots-clés :
  • Électrophorèse capillaire
  • Spectrométrie de masse
  • Protéines
  • Anticorps monoclonaux
Résumé : Les interfaces permettant le couplage entre l'électrophorèse capillaire (CE) et la spectrométrie de masse (MS) à source ESI souffrent actuellement d'un manque de robustesse ou de sensibilité. Les travaux présentés décrivent la mise en oeuvre d'un nouveau type d'interface CE-ESl-MS â haute sensibilité CESl-MS. La caractérisation du spray généré par CESl-MS a montré la production d'un nanoESI induisant une augmentation importante de la sensibilité par rapport au régime ESI classique. Le système CESl-MS a pu ainsi être mis en oeuvre comme plateforme d'infusion nanoESI et utilisé pour l'étude de complexes non-covalents de haut poids moléculaires en MS native. Une méthodologie par CESl-MS/MS a également été développée pour la caractérisation complète de la structure primaire d'anticorps monoclonaux (mAbs). Les résultats montrent la possibilité en une unique injection de caractériser l'ensemble de la séquence d'acides aminés, un nombre significatif de glycosylations et l'ensemble des modifications d'intérêts. Cette méthodologie a pu être appliquée pour déterminer la similarité entre des mAbs commerciaux et leur candidat biosimilaire respectif.
 
Type de contenu : Text
Format : PDF
 
Entrepôt d'origine : STAR : dépôt national des thèses électroniques françaises
Identifiant : 2014STRAF040
Type de ressource : Thèse