Caractérisation des fonctions des modifications post-traductionnelles de PCNA à l'aide d'un nouvel outil génétique
Langue Français
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Auteur : Dietsch, Frank
Date de soutenance : 09-04-2019

Directeur(s) de thèse : Chatton, Bruno

Établissement de soutenance : Strasbourg
Laboratoire : Biotechnologie et signalisation cellulaire (Strasbourg ; 2011-....)
École doctorale : École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
 
Discipline : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : PCNA, Modifications post-traductionnelles, Nouvel outil génétique, CRISPR-Cas9, Plasmide de complémentation, Mutants PCNA D122A et E124A, Voie de dégradation ubiquitine-dépendante, CRL4Cdt2, P21, Re-réplication, Mort cellulaire
Mots-clés :
  • Génétique moléculaire
  • Protéines -- Modifications posttraductionnelles
  • Cellules immunocompétentes
  • Ubiquitine
  • Antigène nucléaire de prolifération cellulaire
Résumé : PCNA est une protéine essentielle qui intervient dans de nombreux mécanismes cellulaires et qui possède de nombreuses modifications post-traductionnelles (MPTs) dont les fonctions de certaines, restent encore inconnues. Afin d’étudier la fonction de ces MPTs, nous avons développé un nouvel outil génétique permettant in cellulo, de substituer la protéine endogène PCNA par une version mutée de la protéine appelée version de complémentation. La technique consiste à cotransfecter des cellules en culture avec deux types de plasmides. Un premier plasmide permet l’invalidation du gène de PCNA endogène dans les cellules transfectées par le système CRISPR-Cas9. Le deuxième plasmide dit de complémentation permet l’expression d’une forme mutée de PCNA. Sur l’ensemble d’une banque de mutants testés, deux mutants de PCNA se sont avérés être létaux (D122A et E124A). Nous avons démontré que ces deux sites sont impliqués dans l’initiation d’une voie de dégradation ubiquitine dépendante CRL4Cdt2 essentielle pour la mise en place de la protéolyse d’un cocktail de protéines (cdt1, p21, set8) durant la phase S. Nous avons démontré que les cellules mutantes pour PCNA (D122A et E124A) accumulent la protéine p21. Ce défaut de dégradation de p21 provoque alors des évènements de re-réplication menant à terme à la mort des cellules mutantes.
 
Type de contenu : Text
Format : PDF
 
Entrepôt d'origine : STAR : dépôt national des thèses électroniques françaises
Identifiant : 2019STRAJ014
Type de ressource : Thèse