Suivi site-sélectif et fidèle de modifications locales d'acides nucléiques en molécules uniques
Langue Anglais
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Modalités de diffusion de la thèse :
  • Thèse confidentielle jusqu'au 25/07/2027.
 
Auteur : Cathagne, Raphaël
Date de soutenance : 25-07-2022

Directeur(s) de thèse : Mély, Yves - Didier, Pascal

Président : Léonard, Jérémie
Rapporteur(s) : Salomé, Laurence - Sliwa, Michel

Établissement de soutenance : Strasbourg
Laboratoire : Laboratoire de bioimagerie et pathologies (Strasbourg ; 2018-....)
École doctorale : École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
 
Discipline : Biophysique
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : ThG, Epigénétique, Basculement de base, UHRF1, DNMT1, Microscopie, Molécule Unique, Sra
Mots-clés :
  • Épigénétique
Résumé : Parmi les acteurs de la régulation épigénétique qui régissent l'expression des gènes, la protéine UHRF1 joue un rôle clé dans le maintien et la transmission des modifications épigénétiques. Cette protéine recrute l'ADN méthyltransférase DNMT1 sur les sites CpG hémi-méthylés via son domaine SRA. Des études de cristallographie ont mis en lumière le mécanisme du complexe SRA/ADN et ont révélé que la protéine induit un basculement de base de la méthylcytosine. Au cours de ce travail de thèse, nous avons cherché à mieux comprendre la dynamique du processus de basculement des bases méthylcytosine au niveau de la molécule unique et à suivre le mécanisme d'interaction entre le domaine SRA et l'ADN hémiméthylé. Pour atteindre ces objectifs, deux méthodes différentes reposant sur la microscopie à molécule unique ont été développées. La première est basée sur le suivi de la dynamique au niveau de la molécule unique de la liaison de SRA à l'ADN hémi et non méthylé en surveillant l'intensité de FRET. La seconde approche visait à capturer le signal de la thiénoguanosine, thG, un analogue de la guanosine qui absorbe dans l'UV, à l'échelle de la molécule unique sur un microscope en champ large de notre conception, développé pendant la thèse. Des études antérieures réalisées dans notre laboratoire ont déjà montré l'efficacité de la thG dans le suivi en temps réel de la dynamique de basculement des bases induite par le domaine SRA de l'UHRF1 sur des duplex hémi-méthylés. Notre approche repose sur des expériences de molécules uniques avec de l'ADN marqué au thG, et soutenue par une nouvelle stratégie de résonance plasmonique pour augmenter sa luminosité.
 
Type de contenu : Text
Format : PDF
 
Entrepôt d'origine : STAR : dépôt national des thèses électroniques françaises
Identifiant : 2022STRAJ128
Type de ressource : Thèse