Utilisation de CRISPR-Cas9 chez Psammomys obesus pour examiner la vulnérabilité des cônes aux mutations du gène Abca4 impliqué dans la maladie de Stargardt
Langue Anglais
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Modalités de diffusion de la thèse :
  • Thèse confidentielle jusqu'au 06/11/2023.
 
Auteur : Sassone, Fabiana
Date de soutenance : 06-07-2023

Directeur(s) de thèse : Hicks, David

Président : Dollfus, Hélène
Rapporteur(s) : Rozet, Jean-Michel - Kalatzis, Vasiliki

Établissement de soutenance : Strasbourg
Laboratoire : Institut des neurosciences cellulaires et intégratives (Strasbourg)
École doctorale : École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
 
Discipline : Neurosciences
Classification : Médecine et santé, Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : Rétine, Photorécepteurs, Maladie de Stargardt, Gène Abca4, Crispr-Cas9, AAV, Psammomys obesus
Mots-clés :
  • Dégénérescence rétinienne - Génétique moléculaire
  • Photorécepteurs (cellules) de la rétine
  • Oeil -- Maladies -- Thérapeutique
Résumé : La maladie de Stargardt 1 (STGD1) est une maladie autosomique récessive. Le gène dans lequel les mutations sont responsables a été identifié, Abca4, codant pour un membre de la super famille des cassettes de liaison à l'ATP, exprimé spécifiquement dans la rétine. L'objectif de ce projet est de comparer la vulnérabilité des photorécepteurs en bâtonnets et cônes à la perte d'Abca4 par une stratégie CRISPR-CAS9 utilisant un rongeur diurne. Le modèle animal, Psammomys obesus, est une espèce diurne riche en cônes dans laquelle les cônes sont représentés en grand nombre (~ 30-40% de photorécepteurs totaux), ressemblant plus étroitement à la macula humaine et permettant des détails structurels, fonctionnels et analyses biochimiques. Nous avons effectué des injections sous-rétiniennes de constructions Adeno-Associated Virus (AAV)-CRISPR-Cas9 chez Psammomys obesus, pour obtenir un Abca4 - KO. Une fois ayant confirmé la perte d'Abca4, pour analyser les conséquences fonctionnelles et morphologiques nous avons réalisé des analyses non invasives (électrorétinographie, tomographie par cohérence optique, imagerie du fond d'œil). Les yeux traités présentent une dégénérescence rétinienne étendue et rapide 2 mois après l'injection, comme le montre l'OCT, et l'enregistrement ERG a montré une baisse significative des réponses lumineuses photopiques (cônes). En conclusion, les rongeurs riches en cônes offrent un scénario unique pour explorer les changements moléculaires et cellulaires survenant dans les maculopathies humaines telles que STGD1, et devrait fournir un moyen précieux d'évaluer les stratégies thérapeutiques potentielles.
 
Type de contenu : Text
Format : PDF
 
Entrepôt d'origine : STAR : dépôt national des thèses électroniques françaises
Identifiant : 2023STRAJ042
Type de ressource : Thèse