Mise au point d'un système CRISPR-Cas12a ciblant l'ADN mitochondrial humain
Langue Anglais
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Modalités de diffusion de la thèse :
  • Thèse confidentielle jusqu'au 31/12/2025.
  • Thèse soumise à l'embargo de l'auteur jusqu'au 31/12/2025 (communication intranet).
 
Auteur : Nikitchina, Natalia
Date de soutenance : 26-10-2023

Directeur(s) de thèse : Entelis, Nina

Établissement de soutenance : Strasbourg - Skolkovo Institute of Science and Technology (Moscou)
Laboratoire : Génétique moléculaire, génomique et microbiologie (Strasbourg)
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
 
Discipline : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Classification : Médecine et santé, Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : Mitochondries humaines, ADN mitochondrial, Mutations, MitoCRISPR, Cas12a, Importation mitochondriale
Mots-clés :
  • Maladies neuromusculaires - Génétique
  • ADN mitochondrial
  • CRISPR (génétique)
Résumé : Les maladies neuromusculaires chez l’homme sont souvent causées par des mutations de l’ADNmt. La gravité de ces maladies dépend du niveau d’hétéroplasmie, où l’ADNmt mutant et sauvage coexistent dans la même cellule. Le développement d'approches expérimentales permettant la manipulation de l’ADNmt est crucial pour mettre au point des nouvelles thérapies. Ici, nous avons adapté le système CRISPR-AsCas12a de type V, qui reconnaît les séquences PAM riches en AT, pour une importation efficace dans les mitochondries humaines. La nucléase AsCas12a, portant le MTS de la sous-unité ATPase 9 de Neurospora crassa, exprimée dans une lignée cellulaire stable, a montré une localisation mitochondriale. Nous avons démontré que l’importation d’ARNcr ne nécessite pas de signaux de localisation mitochondriaux supplémentaires, mais dépend de sa structure secondaire. L’ARNcr peut être divisé en parties d’échafaudage et d’espacement, préservant ainsi la fonctionnalité du système, et l’espaceur peut être importé dans les mitochondries. Pour la première fois, en utilisant à la fois le séquençage Sanger et le séquençage de nouvelle génération, nous avons démontré qu'une délétion dans l'ADNmt humain peut être induite par un système CRISPR/Cas mitochondrial.
 
Type de contenu : Text
Format : PDF
 
Entrepôt d'origine : STAR : dépôt national des thèses électroniques françaises
Identifiant : 2023STRAJ086
Type de ressource : Thèse