Sondes fluorescentes à émission duale pour la caractérisation d'interactions impliquant des protéines : application aux protéines rétrovirales
Langue Anglais
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Auteur : Shvadchak, Volodymyr
Date de soutenance : 20-04-2009

Directeur(s) de thèse : Mély, Yves - Rocquigny, Hugues de


Établissement de soutenance : Université de Strasbourg
École doctorale : École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....)
 
Discipline : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie
Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie

Mots-clés libres : Sondes fluorescentes
Mots-clés :
  • Sondes fluorescentes - Thèses et écrits académiques
  • Réactions de transfert de protons - Thèses et écrits académiques
  • VIH (virus) - Thèses et écrits académiques
Résumé : Dans ce travail, nous avons développé des sondes sensibles à l'environnement pour suivre les interactions de protéines entre elles, avec des acides nucléiques ou avec des membranes. Dans ce but, nous avons développés des fluorophores de la famille des 3-hydroxychromones (3HC) et des 3-hydroxyquinolones (3HQ). Ces sondes présentent à l'état excité une réaction de transfert de proton intramoléculaire (ESIPT) conduisant à deux bandes d'émission, permettant de caractériser les propriétés de cet environnement via le rapport d'intensités de ces deux bandes. La réaction ESIPT des 3HQs s'est révélée être irréversible et sensible à la polarité, à la basicité et la viscosité du milieu, contrairement aux 3HCs qui ne sont pas sensibles à cette basicité et donnent une réponse claire aux modifications de polarité et d'hydratation. Deux sondes ont été couplées au groupement amino-terminal de peptides préparés par synthèse en phase solide. En marquant la protéine de la nucléocapside (NC) de HIV-1 par la 2-furyl-3 hydroxychromone, une forte baisse, corrélée à la structure du complexe obtenu, du rapport d'intensité des deux bandes est observée lorsque NC se fixe à des oligonucléotides. Cette réponse peut être utilisée pour identifier le site de fixation préférentiel de NC. Cette sonde a également été appliquée avec succès pour suivre l'interaction d'un petit peptide avec son anticorps. Le marquage du domaine C-terminal de la protéine Vpr de HIV-1 avec la 4 -dimethylamino-3 hydroxyflavone sensible aux milieux apolaires a été utilisé pour déterminer la localisation du peptide lié à une biomembrane et préciser l'affinité du peptide en fonction de la phase et de la composition de la membrane.
 
Type de contenu : Text
 
Entrepôt d'origine : Ressource locale
Identifiant : ecrin-ori-299569
Type de ressource : Thèse